乳杆菌重组S-层蛋白的纯化及各型FMDV表位嵌入效果的鉴定

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wozhixiangxiazai1
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口蹄疫Foot-and-Mouth Disease, FMD);是由口蹄疫病毒Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的一种偶蹄动物的急性、热性、高度传染性疾病,一旦暴发之后给畜牧业带来巨大的经济损失。目前疫苗接种是控制FMD的最重要措施之一,常用的疫苗是全病毒的灭活疫苗,灭活疫苗虽然在预防和控制FMD起着重要作用,但在疫苗应用当中显出很多不足之处,如纯化病毒颗粒难度大,储存病毒颗粒条件苛刻,疫苗接种后免疫效果不稳定等。目前,我国流行的FMD主要以A、O和Asia Ⅰ;型交替出现,而且FMDV各型之间几乎无交叉免疫保护力,所以单价疫苗在免疫实践中难以成效。本研究对已经构建的含有抗原基因SLP和SLP-MultiVP1的原核表达载体pGEX-SLP和pGEX-SLP-MultiVPl进行IPTG诱导表达,对获得含有GST标签蛋白的GST-SLP和GST-SLP-MultiVP1合蛋白,利用(?)ierce(?) GST Spin Purification Kit:亲和层析和氯化锂沉淀法进行纯化并将纯化结果进行比较。采用各型FMDV如A、O和Asia Ⅰ型疫苗株阳性血清在重组融合蛋白GST-SLP-MultiVP1中进行各表位的识别,并在体外经凝血酶切除GST标签蛋白质后,对SLP-MultiVP1蛋白质再进行表位识别试验。具体研究结果如下:1.对含pGEX-SLP;和(?)GEX-SLP-MultiVP1重组质粒的菌液进行IPTG诱导表达,重组蛋白经(?)DS-PAGE和Western blotting方法鉴定,证明了大小分别约为71kDa和80kDa的重组融合蛋白的存在,这与理论值相符。2.利用Pierce(?) GST Spin Purification Kit亲和层析法和氯化锂沉淀的纯化方法,对两种重组融合蛋白进行纯化,获得了纯度较高的GST-SLP:重组融合蛋白,但是重组融合蛋白GST-SLP-MultiVP1的纯化效果不佳。3.不论标签蛋白GST融合与否,各型FMDV如A、O和Asia I型疫苗株阳性血清均能够识别重组融合蛋白GST-SLP-MultiVP1嵌入的各型表位,表明GST标签蛋白质不影响重组蛋白质SLP的折叠,并各型FMDV表位可能位于重组蛋白质SLP的表面。本研究进一步为构建多价或联合表位肽疫苗载体及其免疫原性研究奠定了基础。
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