【摘 要】
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在该文中,gp120基因是通过PCR方法的获得的.然后克隆到专为PCR扩增子设计的T-载体上进行测序.接下来亚克隆到pMelBac B转移载体上.下一步是利用Bac-N-Blue和 上面已经构建的
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在该文中,gp120基因是通过PCR方法的获得的.然后克隆到专为PCR扩增子设计的T-载体上进行测序.接下来亚克隆到pMelBac B转移载体上.下一步是利用Bac-N-Blue和 上面已经构建的含有HIV-1gp120基因的杆状病毒转移载体(pSHIV120)共感染昆虫细胞.通过病毒DNA(已线化)和转移载体在宿主细胞内的同源重组,最终会形成环状的能够自我复制感染细胞的重组病毒.转化反应是通过阳离子脂质体的介导而完成.所以,带正电荷的脂质体-DNA复合物促进与负电荷的质膜结合.通过脂质体与细胞膜的融合导致细胞吸收外源DNA.随后重组蛋白通过重组病毒的增殖分泌途径分泌到胞质外部.表达蛋白的信号肽序列来自与蜜蜂的蜂毒肽.蜂毒肽在原宿主密蜂体内能够大量表达,并且能够分泌到胞外,实践中,利用Sf9来进行转染反应和重组斑的鉴定.最后,成功地获得了纯化后的重组病毒,为今后的工作打下了坚定的基础.
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