1.研究背景:急性胰腺炎是临床常见的危重疾病,可分为轻型(MAP)和重型(SAP)。后者常伴有严重并发症,早期可出现休克,引起多器官功能不全(MODS),严重者可引起多器官衰竭(MOF)。近100多年来,在AP治疗方面(特别是SAP),国内外经历了“手术—保守—早期手术—个体综合治疗”的探索变化阶段。现在多不主张早期手术,而是采取非手术治疗为主,同时严密观察病情变化,若发现手术指征,则及时手术。AP病因及发病机制至今还不是很明确,认为是多因素发病。迄今为止对AP仍缺乏特异和有效的治疗措施,死亡率仍高。治疗的基本原则是减少胰液分泌,抑制胰酶活性,预防并发症。SAP的手术治疗原则以坏死感染为主要手术指征。中医学文献中虽无胰腺的专名。但在历代中医文献对此病都有不同的描述,而大柴胡汤是治疗急性胰腺炎的基本方剂,疗效确切。临床实践证明急性胰腺炎以大柴胡汤予以为主的中药治疗后,临床症状可较快减轻或消失,各种全身、局部并发症的发生明显减少。动物实验发现,其能发挥多方面的作用,能抑制胰蛋白酶、胰脂肪酶及与本病发病直接有关的胰酶;利胆、降低奥迪氏括约肌张力;改善胃肠粘膜的血流灌注.缓解其缺血、缺氧状态,有利于胃肠粘膜损伤的修复;抑制单核巨噬细胞等免疫功能细胞的过度活化,降低炎性细胞因子及炎性介质的产生。蛋白质组学(proteomics)是研究细胞内全部蛋白质的组成及其规律的学科,对揭示生命活动规律,探讨重大疾病机制,疾病诊断和防治、新药的开发提供重要的理论基础。其中,2-DE是目前分析组分复杂蛋白质中分辨率最高的方法,日益受到人们的广泛关注。双向凝胶电泳技术(2-DE)、质谱技术(MS)和计算机图像数据处理与蛋白质组数据库(蛋白质信息学)是其研究的三大关键核心支撑技术。双向电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)是蛋白质组研究中最为广泛应用的蛋白质分离方法,是目前分析组分复杂蛋白质中分辨率最高的方法,日益受到人们的广泛关注。质谱技术(MS)是指通过纯化细胞器或蛋白质复合物,用质谱鉴定蛋白质组分,确定蛋白质和蛋白质相互作用的亚细胞位置,十分适合分析成分复杂的微生物样品。线粒体是真核细胞中最复杂和最重要的细胞器之一,普遍存在于有氧呼吸的真核细胞的细胞质中。是细胞内的能量供应中心,线粒体功能改变与细胞凋亡、衰老、肿瘤的发生密切相关;是目前临床、基础研究的热点。2.研究目的:以大柴胡汤为主的复方中药汤剂是目前治疗急性胰腺炎的主要方剂,而现在对其的研究基本仍处于临床疗效观察或激素水平的研究。以动物模型的胰腺腺泡细胞线粒体为研究对象,从免疫学及蛋白质组学方面着手深入研究急性胰腺炎的病理损伤机制,为中医治疗对线粒体蛋白质组学的变化提供新的理论基础和思路。3.研究方法:3.1临床研究选取36例确诊为MAP的患者,按照随机方法分为单纯西医治疗+安慰剂组和西医治疗+大柴胡汤组,治疗疗程为7d。主要检测治疗前后患者血清胰淀粉酶的变化。3.2动物研究3.2.1 AP动物模型制作随机选择SD大鼠大鼠32只,分为对照组和实验组各15只,制成大鼠AP模型。2只为正常空白组3.2.2灌药方式术后12小时开始,对照组15只老鼠灌喂生理盐水5ml,并每隔24小时灌入5ml。实验组15只老鼠灌喂大柴胡汤剂(含原生药0.1g/ml),并每隔24小时灌入5ml。3.2.3样本的采集实验组和对照组在灌服首剂中药和生理盐水后12、24、72小时分3批处死,每组每批5只。断头处死的大鼠,立即取出胰腺(约0.5g),以提制胰腺腺泡细胞3.3提取大鼠胰腺细胞线粒体的实验步骤处死后的大鼠立即取出胰组织后经处理得到胰腺腺泡细胞。利用线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒进行腺泡细胞线粒体蛋白质的提取,提取后的线粒体蛋白置-80℃保存。3.4利用2-DE和MS技术对线粒体进行分析4.结果:4.1西医治疗+大柴胡汤组与西医治疗+安慰剂组相比,患者血清胰淀粉酶在入院第1、3、5天差异有统计学意义(P＜0.05)。4.2 2-DE研究表明,通过对急性胰腺炎模型大鼠进行蛋白质表达水平上的研究发现,大鼠胰腺腺泡线粒体的蛋白表达也与正常状态出现了显著的差异,在大鼠进行大柴胡汤治疗后,使很多蛋白质的缺失或特异表达都得到了一定程度的恢复,同时又产生了一系列有别于正常状态的新的变化。4.3而运用质谱技术研究方法对大柴胡汤治疗急性胰腺炎的大鼠胰腺腺泡细胞线粒体蛋白进行了比较分析研究,发现了一些差异蛋白的表达。5.结论:2-DE研究表明可见急性胰腺炎状态会出现蛋白表达量变化、蛋白表达缺失、甚至出现特异表达蛋白等一系列蛋白表达紊乱,在大鼠进行大柴胡汤治疗后,使很多蛋白质的缺失或特异表达都得到了一定程度的恢复,同时又产生了一系列有别于正常状态的新的变化。这说明模型所产生的这些差异蛋白确实与急性胰腺炎的发生,治疗密切相关;大柴胡汤对急性胰腺炎的许多相关蛋白的表达有调节作用,大柴胡汤对急性胰腺炎的治疗作用可能与改变机体的这些特异蛋白质的表达及修饰有关。这与中医所遵循的整体观念,对症治疗的原则是完全一致的。而运用质谱技术研究方法发现了一些差异蛋白的表达,虽然由于条件的限制,我们还不能详细地阐明这些蛋白的功能、它们和急性胰腺炎发病机制的相互关系以及大柴胡汤如何通过影响它们的表达来达到治疗急性胰腺炎的目的,但是这些差异表达蛋白将为了解急性胰腺炎的病理生理机制提供重要的信息,对于在将来进一步探讨大柴胡汤对于这些蛋白的分子作用机制打下了很好的基础。