本研究从药用植物材料混配的腐解物和经上述植物材料混合处理3个月后的草莓重茬土壤中共分离纯化得到40株不同形态的细菌。经平板对峙培养法测定40株待测细菌的拮抗作用,结果表明:只有菌株Bs-21对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌这三种病原菌的抑菌带宽度都达到5mm以上,且病原菌与拮抗菌之间形成抑菌带的宽度不随时间的推移而显著改变。 对Bs-21进行鉴定,其形态特征、培养性状以及生理生化特征均与伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)中描述的枯草芽孢杆菌的特征相符合,因此确定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 通过对Bs-21的抑菌机制研究表明,Bs-21的菌体和代谢产物均有一定的抑菌作用。采用对峙培养法测定了Bs-21的菌体对三种病原菌菌丝的抑制作用,通过显微镜观察,三种病原菌的菌丝的生长均受到抑制,并引起菌丝不同形态的畸形、原生质凝结、内含物外溢等现象;说明Bs-21可能产生多肽类和水解酶类物质。 测定了Bs-21不同处理对尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌的分生孢子萌发的影响,结果表明,Bs-21的发酵液滤液、高温杀死菌体的发酵液和发酵液原液对尖孢镰刀菌分生孢子萌发的抑制率分别为37.27%、45.69%和69.56%,对大丽轮枝菌的分生孢子萌发的抑制率分别为62.11%、61.56%和72.27%;同时Bs-21发酵液的不同处理都能不同程度地引起尖孢镰刀菌孢子的畸形和萌发形成的芽管产生泡状物;引起大丽轮枝菌的分生孢子的膨大畸形,芽管长度明显低于PD培养液对照;此外,Bs-21的高温灭菌液对尖孢镰刀菌分生孢子萌发的抑制作用在P=0.01水平上高于发酵液滤液,说明Bs-21的代谢产物可能由多种物质组成,且受热后活性有可能增强。 通过含药介质法测定了Bs-21代谢产物的抑菌活性,结果表明:Bs-21的发酵滤液和发酵高温灭菌液的不同稀释比例对三种病原菌菌丝的生长均表现出了一定的抑制作用,且浓度愈高,抑制作用愈强。但对不同病原菌抑制作用差别明显,对立枯丝核菌菌丝生长抑制作用较弱,在稀释比例为1:5时,Bs-21发酵滤液和发酵高温灭菌液对其的抑制率分别为27.49%和17.78%;而对尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌的菌丝生长抑制作用较强,在稀释比例为1:5时,Bs-21发酵滤液对两者的抑制率分别为48.53%和48.92%,Bs-21发酵高温灭菌液对两者的抑制率分别为37.33%和33.97%;同时,Bs-21发酵滤液对三种病原菌的抑制效果在总体水平上高于Bs-21发酵高温灭菌液,但高温灭菌液仍有较强的活性,说明Bs-21的代谢产物中含有具热稳定性的物质。 由于拮抗菌Bs-21对草莓重茬三种病原菌都具有很好的拮抗作用,具有作为生防制剂的潜力,故对其研制为生防菌剂并加以推广应用做出了初步的研究。本研究初步