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神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)来源于交感神经系统,是一种常见的小儿颅外实体外周神经系统恶性肿瘤,占儿童肿瘤发生率的8%~10%以及儿童癌症死亡的15%。神经母细胞瘤从良性神经元到形成肿瘤的过程都具有异质性,其较强的增殖和转移能力是导致患者死亡的主要因素。神经母细胞瘤的临床表现各不相同,在晚期的病人中通常会发现其对包括手术、化疗和放疗等传统的治疗方法具有很强的抗性。本研究通过对神经母细胞瘤增殖和成瘤的初步探究为神经母细胞瘤治疗寻找新靶点提供理论基础。约25%~30%的儿童神经母细胞瘤患者MYCN基因有扩增,且扩增倍数越高预后效果越差。研究表明MYCN具有促进神经母细胞瘤细胞增殖生长,抑制分化凋亡,促进侵袭转移的作用。MINA(MYC induced nuclear antigen)属于组蛋白去甲基化酶JMJD家族,具有H3K9me3去甲基化功能,在多种肿瘤中均有表达,在细胞增殖与生长中具有非常重要的作用。本文首次揭示了MYCN通过结合在MINA启动子区域调控神经母细胞瘤细胞的增殖与成瘤,获得的主要结果如下:1、MYCN和MINA在神经母细胞瘤中的预后关系通过对R2数据平台神经母细胞瘤公共数据库Versteeg中的88例神经母细胞瘤临床患者的统计,利用Kaplan–Meier分析,结果表明MYCN和MINA在神经母细胞瘤中的预后密切相关,MYCN低表达患者预后良好,而MYCN高表达患者预后较差,MINA表达也是如此。通过Western Blot实验检测MYCN和MINA在神经母细胞瘤细胞中的表达情况,实验结果显示:MYCN在神经母细胞瘤细胞中普遍表达,在BE(2)-C细胞中含量最高,在SHEP1细胞中含量最低,MINA在神经母细胞瘤中的表达情况也是如此。2、探究MYCN和MINA对神经母细胞瘤细胞生长、增殖及克隆形成能力的影响为检测MYCN和MINA对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,在MYCN本底高表达的BE(2)-C细胞中分别干涉MYCN和MINA,利用MTT和BrdU实验检测细胞的生长,结果均显示细胞增殖能力减弱,成瘤性降低。在干涉MYCN的BE(2)-C细胞中过表达MINA,通过相应实验检测处理后的细胞增殖与成瘤情况,发现细胞的增殖能力成瘤能力得到一定的恢复。我们在MYCN本底低表达的SHEP1细胞中过表达MYCN后,利用MTT和BrdU实验检测细胞的生长,结果显示过表达MYCN后SHEP1细胞生长能力增强,以及BrdU标记的阳性细胞增加。为进一步探究MYCN和MINA对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,在已过表达MYCN的SHEP1细胞中干涉MINA,结果显示MINA干涉后,SHEP1细胞生长受到抑制、BrdU标记的阳性细胞减少。利用Western blot实验方法检测发现:在敲低MYCN的BE(2)-C细胞中MINA表达含量也降低,在过表达MYCN的SHEP1细胞中MINA含量升高。3、MYCN和MINA调节神经母细胞瘤细胞增殖和成瘤的机制初探通过染色体免疫共沉淀实验发现MYCN结合在MINA的启动子区域,且在转录起始位点上游593~472区域、1043~839区域和849~573区域结合能力较强,因此,初步推测MYCN通过MINA调控神经母细胞瘤细胞生长、增殖、以及肿瘤的发生。