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背景与目的:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种可引起多个组织器官损伤的自身免疫病,患者体内免疫调节功能发生紊乱。调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)在维持机体免疫耐受及调节免疫应答中具有重要作用。有研究显示,SLE患者体内Treg细胞的数量和功能均出现异常。IL-2和TGF-β是促进诱导性Treg细胞(iTreg)形成的关键性细胞因子。已经证实,IL-2及其受体异常表达与SLE的发病密切相关。目前对于胸腺来源的天然型Treg细胞(nTreg)的研究比较广泛,而对于SLE患者外周血中iTreg细胞转化形成及其影响因素的研究甚少。本课题旨在通过研究SLE患者外周血CD4~+T细胞表面IL-2受体β(CD122)、γ_c(CD132)链表达及其对Foxp3~+iTreg细胞诱导形成的影响,为深入探讨SLE患者外周免疫功能紊乱的分子机制提供参考依据。方法:(1)分离正常对照、SLE以及类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并通过免疫磁珠分离法进一步分选出CD4~+CD25~-T细胞;(2)用TGF-β和IL-2诱导分离获得的CD4~+CD25~-T细胞转化为CD25~+Foxp3~+iTreg细胞,应用流式细胞术(FCM)检测转化后细胞CD25~+Foxp3~+/CD4~+比值;(3)应用FCM检测PBMCs中CD4~+T细胞亚群的CD25~-CD122(IL-2Rβ链)~+、CD25~-CD132(γ_c链)~+T细胞的比例,同时以荧光定量PCR法检测分选出的CD4~+CD25~-T细胞内CD122、CD132mRNA相对表达水平;检测由CD4~+CD25~-T细胞经体外诱导培养所转化形成的CD4~+CD25~+T细胞表面CD122和CD132的表达水平;(4)检测由CD4~+CD25~-T细胞经体外诱导培养所形成的CD4~+CD25~+T细胞内Stat5磷酸化水平以及SMAD3、SOCS3 mRNA相对表达水平;(5)构建γ_c基因小干涉RNA(γ_c-siRNA)慢病毒载体;用γ_c-siRNA慢病毒转染正常人CD4~+CD25~-T细胞,以siRNA抑制其γ_c基因表达,再将其进行诱导培养,检测转化形成的CD4~+CD25~+T细胞内Foxp3和pStat5表达水平。结果:(1)SLE患者外周血CD4~+CD25~-T细胞经诱导转化后形成的CD25~+Foxp3~+T细胞亚群比例显著低于正常对照组,且与SLEDAI呈负相关;RA患者未见明显异常;(2)与正常对照组相比,SLE患者外周血CD4~+CD25~-T细胞表面CD122表达变化不明显,而CD25~-CD132~+/CD4~+比值显著降低且与SLEDAI呈负相关,其CD4~+CD25~-T细胞内CD132 mRNA相对表达水平亦低于正常对照;SLE患者转化后细胞CD25~+CD122~+/CD4~+、CD25~+CD132~+/CD4~+比值均低于对照组,但仅后者与SLEDAI呈负相关、与Foxp3表达呈正相关;RA患者转化后细胞的CD122、CD132表达并未见异常;(3)SLE患者CD4~+CD25~-T细胞经转化后形成的CD25~+T细胞胞内磷酸化Stat5(pStat5)表达水平低于对照组,且pStat5~+/CD4~+CD25~+比值与SLEDAI负相关、与CD25~+Foxp3~+/CD4~+比值正相关,而其胞内SMAD3和SOCS3 mRNA相对表达水平与对照组无差异;(4)经siRNA作用后,正常人CD4~+CD25~-T细胞CD132表达显著下降,其诱导转化形成的CD4~+CD25~+T细胞内pStat5表达水平显著降低,诱导形成的CD4~+CD25~+Foxp3~+iTreg细胞亦明显减少。结论:SLE患者外周血CD4~+T细胞存在明显的CD132(γ_c链)表达缺陷,导致在向CD4~+CD25~+T细胞亚群转化过程中IL-2受体信号减弱,信号通路下游Stat5分子活化水平降低,进一步导致Foxp3分子的诱导表达缺陷,影响了Foxp3~+iTreg细胞的转化形成。这一免疫学异常与SLE的病理机制密切相关,而与RA无关。