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趋化因子是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子,趋化因子白介素-8被验证具有诱导中性粒细胞迁移等能力,其两受体α(IL8R-α,即CXCR1)和β(IL8R-β,即CXCR2)通过与趋化因子相结合并借助信号转导来实现介导中性粒细胞和淋巴细胞在炎症部位聚集,修复组织损伤等功能,目前两基因已被列入抗乳腺炎的候选基因。
本研究通过采用DNA测序、巢氏PCR和CRS-PCR方法,对中国荷斯坦牛、鲁西黄牛、渤海黑牛的趋化因子受体基因CXCR1的单核苷酸多态性(SNPs)进行研究,结果在CXCR1基因第二外显子发现了4个SNPs,分别为291(C/T)、333(C/T)、337(A/G)和365(C/T),其中337(A/G)位点和365(C/T)位点的碱基突变引起相应位置氨基酸发生改变.337(A/G)位点突变引起异亮氨酸转变为缬氨酸,365(C/T)位点突变引发丙氨酸转变为缬氨酸。
群体遗传多态性检验发现,291(C/T)、333(C/T)、337(A/G)和365(C/T)位点在中国荷斯坦牛、鲁西黄牛、渤海黑牛群体均达到中度多态(0.25<PIC<0.5),群体遗传多态信息含量分布较为平均,4突变位点优势等位基因分别为C、C、A、C,等位基因频率分别为0.82/0.67/0.65、0.80/0.74/0.71、0.63/0.76/0.63、0.70/0.65/0.82、0.56/0.58/0.56。经x2适合性检验.渤海黑牛所有位点全部达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);荷新坦牛在突变位点291(C/T)、333(C/T)和337(A/G)达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05):鲁西黄牛仅在365(C/T)位点达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),说明该位点较受外界引种和突变等影响,群体尚待进一步稳定。
研究中国荷斯坦奶牛CXCR1基因多态性(SNP)与奶牛乳腺炎性状的关联性,使用Phase软件进行单倍型组合预测,构建出15种单倍型和20种单倍型组合。通过单位点基因型与乳腺性状关联性分析发现,291(C/T)和333(C/T)突变不存在显著相关的平均值;337(A/G)突变位点基因型个体在乳脂率、乳蛋白率及产奶量分析上存在显著相关(P<0.05)的平均值;365(C/T)突变位点基因型个体在乳脂率分析上存在显著相关(P<0.05)的平均值。通过单倍型组合与乳腺炎的关联性分析发现在体细胞评分、305天产奶量、乳蛋白率、乳脂量和乳蛋白量5项测试指标中,基因型组合个体之间均存在显著或极显著相关。