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研究背景:瘙痒是一种令人烦恼和厌烦的感觉,刺激机体产生强烈的抓挠欲望,对患者的身体健康和生活质量产生严重影响,且治疗效果并不理想。瘙痒根据其作用时间长短可以分为急性痒和慢性痒,近年来通过对瘙痒研究的逐渐深入,建立了多种瘙痒模型。痒觉起源于皮肤的外周初级感觉神经元,胞体位于背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）和三叉神经节,经脊髓再传入大脑的感觉中枢。外界的伤害性刺激可引起神经元释放三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）增加,ATP作为神经递质能够作用于神经元上嘌呤2受体。P2X3受体参与传递伤害性信息,已有研究表明,P2X3受体参与神经性疼痛,急性疼痛,炎性疼痛和癌症疼痛,并涉及炎症和免疫反应,且有报道指出,在干性痒模型中,造模部位P2X3 mRNA的表达上调。表明P2X3受体不仅参与疼痛反应,且可能在瘙痒神经病变中发挥一定作用。但P2X3受体如何参与瘙痒过程及其作用机理尚不清楚。目的:通过整体及分子水平相结合的研究了解P2X3受体在各种瘙痒模型中的病理生理作用及可能机理,从而为急慢性瘙痒的预防和治疗提供新的理论基础。方法:1、观察P2X3受体在干性痒小鼠病理变化中的作用。建立小鼠干性痒模型。将小鼠分为对照组（Ctrl）、模型组（acetone-ether-water,AEW）、模型+P2X3shRNA组（AEW+P2X3 shRNA）、模型+shRNA阴性对照组（AEW+NC shRNA）、模型+拮抗剂组（AEW+A317491）和模型+磷酸盐缓冲液溶剂组（AEW+PBS）。实验内容:（1）计数各组小鼠抓挠次数观察瘙痒行为变化。（2）采用Real-time PCR、蛋白印迹（western blotting,WB）和免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IHC）检测背根神经节P2X3受体表达变化。（3）应用HE染色观察小鼠造模部位皮肤病理变化。（4）Real-time PCR和蛋白印迹检测炎性因子白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达变化。（5）蛋白印迹检测ERK1/2的磷酸化水平。（6）免疫荧光双标技术观察脊髓中痒觉特异性神经元标记物胃泌素释放肽受体（gastrin-releasing peptide receptor,GRPR）与P2X3受体共表达的变化。2、了解P2X3受体在外周神经系统中通过何种痒觉信号通路参与瘙痒反应。建立小鼠后颈部急性瘙痒模型。将小鼠分为对照组（Ctrl）、P2X3 shRNA组（P2X3shRNA）、shRNA阴性对照组（NC shRNA）。各组小鼠分别注射促进组胺释放的compound48/80和组胺非依赖型致痒剂氯喹,观察各组小鼠瘙痒行为学变化。3、检测P2X3受体特异性激动剂（α,β-methylene ATP,α,β-meATP）和特异性拮抗剂（A317491）在瘙痒中的作用。建立小鼠脸颊模型,通过对α,β-meATP和A317491设置不同的浓度梯度观察各组小鼠瘙痒行为学的变化。结果:1.P2X3受体在干性痒小鼠病理变化中的作用。（1）小鼠行为学（抓挠次数）结果显示:与Ctrl组相比,AEW组小鼠的抓挠次数显著增加（p<0.01）,经P2X3 shRNA和A317491处理后抓挠次数明显减少（p<0.01）,AEW+NC shRNA组和AEW+PBS组与AEW组无明显差异（p>0.05）。（2）Real-time PCR、WB、IHC检测结果显示:与Ctrl组相比,AEW组P2X3受体的表达显著增加（p<0.01）;与AEW组相比,AEW+P2X3 shRNA组和AEW+A317491组中P2X3受体的表达显著下调（p<0.01）;AEW组与AEW+NC shRNA组或AEW+PBS组中P2X3受体的表达无明显差异（p>0.05）（3）HE染色结果显示:AEW组与Ctrl组相比,表皮明显增厚,经P2X3 shRNA及A317491处理后,表皮增厚有所缓解。（4）Real-time PCR和WB检测各组IL-1β和TNF-α的表达,AEW组与Ctrl组相比,IL-1β和TNF-α的表达显著上调（p<0.01）,经P2X3 shRNA和A317491处理后,表达明显下降（p<0.01）。AEW组与AEW+NC shRNA组或AEW+PBS组中炎性物质的表达无显著差异（p>0.05）。（5）与Ctrl组相比,AEW组中ERK1/2的磷酸化水平显著高于正常组（p<0.01）,并且与AEW组相比,经P2X3 shRNA及A317491处理后,ERK1/2磷酸化水平显著下降（p<0.01）。（6）免疫荧光双标结果表明脊髓背角中P2X3与痒觉特异性神经元标记物GRPR共表达。且AEW组、AEW+NC shRNA组和AEW+PBS组荧光强度高于Ctrl组（p<0.01）,AEW+P2X3 shRNA组和AEW+A317491组的荧光强度低于AEW组（p<0.01）。2、P2X3受体参与组胺非依赖型瘙痒。（1）在小鼠后颈部注射组胺依赖型致痒剂compound48/80后,P2X3 shRNA组每5分钟的抓挠次数和30分钟总的抓挠次数与Ctrl组和NC shRNA组相比无显著差异（p>0.05）。（2）小鼠后颈部注射组胺非依赖型致痒剂氯喹后,P2X3 shRNA组在分别前5,10,15,20分钟（每5分钟一个时间段）的抓挠次数与Ctrl组和NC shRNA组相比显著下降（p<0.05,p<0.05,p<0.01,p<0.01）;P2X3 shRNA组与Ctrl组和NC shRNA组30分钟总的抓挠次数相比显著下降（p<0.01）。3、P2X3受体激动剂或拮抗剂能分别激活或抑制P2X3受体参与瘙痒过程。不同浓度的α,β-meATP会对瘙痒抓挠次数产生影响,其中,浓度为0.5μmol/L与0μmol/L相比抓挠次数显著增加（前5分钟总数）（p<0.05）。A317491可以抑制氯喹所诱发的瘙痒,A317491浓度为100 nmol/L与0 nmol/L相比,抓挠次数显著下降（p<0.05）（0-30分钟总数）。结论:P2X3受体为各种急慢性瘙痒所需的关键信号分子。P2X3 shRNA和A317491可缓解干性痒模型中的瘙痒相关神经病变。P2X3受体参与组胺非依赖型瘙痒,P2X3受体激动剂或拮抗剂能分别激活或抑制P2X3受体参与瘙痒过程,表明P2X3受体可以作为瘙痒治疗的一个潜在靶标。