细菌偶联融合蛋白信号流式传导的研究

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本研究利用荧光染色金黄色葡萄球菌,并通过基于金黄色葡萄球菌的流式免疫分析方法对急性早幼粒细胞白血病细胞中的PML-RARα融合蛋白进行了检测。课题采用的细菌是金黄色葡萄球菌,因为其细胞壁上有一种蛋白即金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA),金黄色葡萄球菌蛋白A能与人的及许多其它动物的免疫球蛋白IgG结合的生物学特性。金葡菌蛋白A能与免疫球蛋白G的Fc段结合而不与其Fab段结合,所以不会影响IgG抗体的活性。因而可用含蛋白A的葡萄球菌作为载体,先对其进行荧光染色再结合特异性抗体,表面包被病理融合蛋白捕获抗体的SPA菌用于特异地捕获病理融合蛋白。分析时,生物素标记的报道抗体特异性识别捕获的融合蛋白,PE标记的链霉亲和素再结合报道抗体,流式细胞仪检测荧光强度,即可定量待检测的融合蛋白。实验中使用CFSE对金黄色葡萄球菌进行荧光染色,并对保存的已染色菌体进行流式细胞仪检测,结果显示: CFSE染色荧光强度稳定;用此检测系统可以特异的检测出PML/RARa融合蛋白,并有较高灵敏度。
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