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鸭生长迟缓疫病是近年来我国新出现的传染性疾病,以发病鸭精神萎靡、生长发育迟缓为主要特征。该病主要发生在樱桃谷肉鸭,发病日龄集中在10~25日龄,少数鸭群于5~14日龄也有发病。该病一年四季均可发生,整体的发病率在15%以下。早期从发病鸭体内分离到一株未知RNA病毒,病毒粒子直径在70~100nm之间,有囊膜,命名为鸭生长迟缓病毒(Anhui2株)。该病毒人工感染不致死鸭子,但可在鸭群之间进行水平传播,引起鸭子生长缓慢,残次率增高。本研究以鸭生长迟缓病毒Anhui2毒株作为免疫抗原,分3次免疫6周龄的BALB/c小鼠,小鼠血清的抗体效价可以达到1:10000以上,将效价最高小鼠加强免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,获得抗Anhui2毒株的杂交瘤细胞。经过间接ELISA的筛选和3次连续的亚克隆,得到2株能稳定分泌抗Anhui2株的杂交瘤细胞株,分别命名为1-5和3-6G。通过效价的测定,两株单抗的细胞上清效价均为1:1000,腹水效价分别为1:10000和1:1000。经中和实验测定,2株杂交瘤细胞均具有中和活性,并且特异性良好。以Anhui2全病毒为包被抗原,筛选1-5单抗为使用单抗。对阻断ELISA各条件进行优化,最终确定了Anhui2全病毒作为抗原的最佳包被浓度为1.5μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:10,作用时间为37℃1h。单抗中和效价为1:10000其最佳稀释度为1:20,作用时间为37℃1h。酶标二抗的工作浓度为1:3000,作用时间为37℃1h,建立了检测鸭生长迟缓病毒抗体的阻断ELISA方法。对316份阴性鸭血清样品检测结果进行统计学分析,计算出阴性鸭血清样品的平均抑制率(?X)为1.9%,标准差(SD)为8.0%,规定本方法的判定标准为当阻断率PI≥25.9%时判为抗体阳性;PI≤17.9%时判定抗体阴性;17.9%<PI<25.9%时判为可疑,重复检测1次如果仍低于25.9%,则判为抗体阴性。应用该方法对Ⅰ型鸭肝炎病毒、Ⅲ型鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭呼肠孤病毒、新型鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒等阳性血清和4份SPF鸭阴性血清进行检测,结果证明本研究中所建立的方法具有良好的特异性,此外通过抗体敏感性实验证明该方法也具有良好的敏感性。将Anhui2毒株在10日龄SPF鸡胚上进行连续传代,通过动物实验,观察传代毒对雏鸭的致病性变化,确定其致弱情况。结果发现与亲本毒相比,第100代毒接种3日龄的鸭子后,对其体重影响程度减小;通过免疫保护试验,发现第111代毒可以对Anhui2的攻击产生有效的保护。由此可见,Anhui2传代毒通过在鸡胚上的连续传代达到一定程度致弱,并且免疫原性未发生变化,表明通过传代致弱研究疫苗是可行的方法。