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背景Micro RNAs(mi RNAs)是长度为20-22个核苷酸的单链非编码小分子RNA,在真核生物细胞中广泛表达,通过与靶基因m RNA结合诱导其降解或阻遏翻译过程以调控靶基因表达。mi RNA在细胞生长发育过程起着重要的作用,参与细胞的增殖、分化、凋亡等过程。mi RNA还可以通过不同的调节途径参与肿瘤的形成,其异常表达与人类肿瘤的发生、发展密切相关。近年来研究也表明,mi RNA不仅在调节造血干/祖细胞增殖、分化及凋亡过程中起着重要作用,还参与了白血病的发生与发展。急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)是起源于淋巴细胞系(前体B、T或成熟B淋巴细胞)的恶性克隆性疾病,是血液系统常见的恶性肿瘤之一。儿童急性白血病中ALL约占80%,高发年龄段是2-5岁,成人急性白血病中ALL约占20%,高发年龄段是50岁以后,85%的儿童ALL与75%的成人ALL是B-ALL。随着治疗方案的不断改善,B-ALL的缓解率大大提高,儿童患者多数可以达到完全缓解。BCR/ABL融合基因是由9号染色体上的原癌基因ABL,易位至22号染色体的BCR区,形成t(9;22)(q34;q11),即BCR/ABL融合基因。它是B-ALL染色体异常的一种类型,称为BCR/ABL融合基因阳性的B-ALL。尽管随着新技术和新药物等诊断和治疗方法应用于临床,使得B-ALL的早期诊断和预后有了很大提高,但BCR/ABL融合基因阳性的B-ALL患者完全缓解困难或完全缓解后易复发,该类患者预后差,死亡率高的情况仍未改善,3-5年的无病生存期(disease-free survival,DFS)<10%,复发率高。因此针对BCR/ABL融合基因阳性B-ALL致病机制进行进一步深入研究,对其诊疗、预后判断,甚至对靶向治疗药物的设计均有重要意义。虽然已有文献报道参与BCR/ABL融合基因阳性的B-ALL的发生发展的重要基因和通路,但大多数集中于编码基因编码蛋白质的分子网络研究,对于非编码基因mi RNAs参与该类B-ALL的作用研究鲜见。目的通过高通量深度测序及荧光定量PCR技术分析和发现BCR/ABL阳性B-ALL相关或特异mi RNAs,初步明确其对该类高危急性白血病的作用性质;生物信息学分析和寻找这些mi RNAs关系密切的靶基因,为BCR/ABL阳性B-ALL发生发展的致病机制研究,以及诊断、治疗、预后分析提供理论基础和新的思路。方法共收集139例住院患者的骨髓标本,其中初诊B-ALL患者68例为实验组;初诊CML患者7例,初诊APL患者11例为疾病对照组;正常对照组患者53例。通过多重巢式PCR结合细胞学、免疫学及细胞遗传学技术确诊BCR/ABL阳性或阴性B-ALL及其他白血病;流式细胞分选BCR/ABL阳性及阴性B-ALL白血病细胞;提取总RNA,行mi RNAs深度基因测序,筛选差异表达mi RNAs;荧光定量PCR进行大临床样本的进一步验证和发现BCR/ABL阳性B-ALL相关mi RNAs;选取部分BCR/ABL阳性B-ALL相关mi RNAs,电转染其模拟物至BCR/ABL阳性及阴性B-ALL白血病细胞株,CCK-8检测这些相关mi RNAs对BCR/ABL阳性B-ALL白血病细胞生长的影响,明确其初步的生物学功能;生物信息学分析和寻找这些相关mi RNAs的靶基因,分析和探讨其与BCR/ABL融合基因及其他基因的调控作用和结合位点。结果1.BCR/ABL阳性B-ALL中存在差异性表达的mi RNAs,这些mi RNAs在正常对照组及正常核型B-ALL中的表达水平亦存在差异。2.BCR/ABL阳性B-ALL中差异性表达的mi RNAs在不同类型的白血病中的表达水平也存在差异。3.mi R-183、4485、5008、5582等相关mi RNAs在BCR/ABL阳性及阴性B-ALL细胞株中也存在差异性表达。4.mi R-183,4485、5008、5582等BCR/ABL阳性B-ALL相关mi RNAs在BCR/ABL阳性B-ALL细胞株中的过表达可抑制BCR/ABL阳性B-ALL细胞增殖。5.BCR/ABL阳性B-ALL相关mi RNAs在BCR、ABL及BCR/ABL融合基因中可能存在直接作用靶点,从而直接或间接参与BCR/ABL阳性B-ALL的发生发展。结论BCR/ABL阳性B-ALL存在低水平表达的mi R-183、4485、5008、5582等mi RNAs,这些BCR/ABL阳性B-ALL相关的mi RNAs可负性调控BCR/ABL阳性B-ALL细胞的生长,进而可能参与该类B-ALL的发生、发展过程;此外,这些mi RNAs在BCR、ABL特别是BCR/ABL融合基因中可能存在直接作用靶点,从而直接或间接参与BCR/ABL阳性B-ALL的发生发展。研究结果可能为BCR/ABL阳性B-ALL的诊疗、预后及靶向药物设计提供初步的理论和实验依据,进而为BCR/ABL阳性B-ALL诊疗策略的提高与改进提供新研究线索。