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研究背景及目的:乳腺癌(Breast Cancer,BC)是全球女性最常见且死亡率最高的癌症,三阴性乳腺癌(Triple-negative Breast Carcinomas,TNBC)缺乏ER、PR、HER2等常见靶向受体的表达,具有更高的侵袭性及肿瘤微环境明显的异质性,相较于其它类型的BC,TNBC复发率、转移率更高,除常规的手术和化疗,缺乏更有效的治疗方法。肿瘤微环境中大部分免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-Associated Macrophages,TAMs),其中M2型TAMs与肿瘤的生长、转移、预后密切相关。脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)在多种肿瘤发生发展过程中起重要作用,BML-111为其最常见的类似物。目前为止,LXA4及其类似物BML-111对于TNBC的治疗及作用尚未阐明,本实验拟研究BML-111对TNBC肿瘤细胞生物学行为的影响。我们推测BML-111能通过ILK通路抑制TAMs诱导的TNBC细胞EMT、迁移及转移。方法:1、收集南昌大学第二附属医院2017.8.1-2019.10.1TNBC患者信息及标本,检测及对比有、无转移患者的原发灶癌细胞E-cadherin的表达、Ki-67指数及TAMs的数目。2、细胞实验分组:空白组:培养基培养TNBC癌细胞(MDA-MB-231、4T1);第二组:培养基培养TNBC癌细胞+BML-111;第三组:培养基培养TNBC癌细胞+BML-111+BOC-2(BML-111特异性受体阻断剂);第四组:条件培养基培养TNBC癌细胞;第五组:条件培养基培养TNBC癌细胞+BML-111;第六组:条件培养基培养TNBC癌细胞+BML-111+BOC-2。3、按上述分组检测BML-111对TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞活性及增殖的影响;4、分组后检测BML-111对TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞迁移及转移的影响;5、分组后检测BML-111对TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞EMT的影响。6、分组后应用蛋白印迹法检测BML-111对TAMs诱导后TNBC癌细胞ILK、Akt、GSK3β、Phosphorylated Akt(p-Akt)、Phosphorylated GSK3β(p-GSK3β)蛋白表达的影响。7、构建并研究BML-111对4T1-MIND动物模型肿瘤生长及转移的影响。结果:1、临床标本:E-cadherin在TNBC非转移组的癌组织中的强表达情况比例更高,TNBC肿瘤中央CD68在非转移组表达明显低于转移组,而肿瘤周边的CD68表达非转移组高于转移组。此外,癌组织E-cadherin阳性率与转移和临床分期呈负相关,与年龄、肿瘤大小、病理分级和Ki-67指数无明显相关性,TNBC癌组织中央区CD68阳性表达与转移和病理分级呈正相关,TNBC癌组织周围区CD68阳性表达情况与转移和临床分期呈负相关。2、BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞的存活率,并且BML-111可以抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞三维培养的细胞簇形成,对TNBC癌细胞具有长期作用。3、划痕实验及Transwell实验证实BML-111可以抑制TNBC细胞迁移能力,尤其是对TAMs诱导后的细胞抑制作用更强。4、免疫荧光实验结果表明BML-111能增加MDA-MB-231和4T1细胞E-cadherin蛋白表达,尤其是TAMs诱导后的细胞,但是BML-111这种作用可以被BOC-2阻断。TAMs诱导后MDA-MB-231和4T1细胞Vimentin表达明显增高,但是BML-111具有抑制Vimentin表达的作用。5、WB实验表明BML-111对TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞ILK蛋白表达具有明显的抑制作用,对Akt及GSK3β蛋白表达没有影响,但是BML-111能抑制MDA-MB-231和4T1细胞p-Akt和p-GSK3β蛋白的表达,并且对TAMs诱导后的细胞抑制作用更明显。6、4T1-MIND模型:BML-111治疗组小鼠肿瘤体积约为空白对照组的50%。7、BML-111治疗组小鼠肺转移的数目和相对面积均显著低于空白对照组,且BML-111治疗组小鼠移植瘤Ki-67指数和F4/80的表达低于空白对照组。结论:1、BML-111能抑制TAMs诱导的TNBC细胞的增殖、迁移、EMT。2、BML-111在TAMs诱导的TNBC细胞中调控ILK/Akt/GSK3β信号通路发挥其抗肿瘤作用。3、BML-111对4T1-MIND模型小鼠肿瘤生长及肺转移有抑制作用。