TBCKL（TBC domain-containing protein kinase-like），又名HSPC302（Hemaotpoietic Stem and Progenitor Cells302）或MGC16169（Mammalian Gene Collection16169）。 TBCKL基因位于4号染色体4q24位，共由24个外显子组成。TBCKL mRNA编码序列全长2682bp，编码893个氨基酸，理论分子量100.7kDa。目前，仅有TBCKL mRNA存在的实验证据，而没有蛋白存在的证据。因此，TBCKL是一个假想蛋白。TBCKL蛋白含有S TKc、TBC和RHOD_Kc三个结构域，其中TBC（Tre-2,Bub2 and Cdc16）结构域已被证明是Rab GAP（Rab GTPase activating protein）的保守结构域，因此TBCKL可能是一个Rab GAP蛋白。本课题的主要内容是探讨假想蛋白TBCKL是否存在，并对它的功能做初步的研究。　　 首先，小鼠TBCKL mAb的Western Blot实验表明：在HepG2和HeLa细胞中确实存在TBCKL蛋白。另外，TBCKL pAb间接免疫荧光的结果显示TBCKL定位在HeLa细胞的胞质中。半定量RT-PCR结果显示，TBCKL mRNA在人类的16种组织中普遍表达，但是在脑、骨骼肌和白细胞中表达量较少。另外，TBCKL在5种人类癌细胞系中也均有表达，其中HepG2和HeLa细胞中TBCKL mRNA的编码序列经测序与NCBI上报道的HepG2的编码序列完全一致。GFP-TBCKL融合蛋白在HeLa细胞中的定位与上述抗体定位是一致的，即间期定位在细胞质中，分裂期定位在除染色体以外的整个细胞内。为了制备更好的TBCKL mAb，我又进行了TBCKL片段的His融合蛋白的诱导表达和纯化，但是纯化效果不是十分理想，还需要继续优化纯化条件以获得更纯的融合蛋白做抗原。我还利用化学合成的siRNA片段成功的在HeLa细胞中实现了TBCKL的基因沉默，并运用蛋白质组学的方法寻找TBCKL RNAi后差异表达的蛋白。共有18个差异蛋白被鉴定出来，其中下调蛋白12个，上调蛋白6个。在下调蛋白中NSFL1（p97） cofactor p47和PDCD6IP（Programmed cell death6-interacting protein）都与细胞的囊泡运输密切相关。另外，TBCKL RNAi后Rab1-11的mRNA水平和高尔基体的形态均无明显变化，TBCKL对于细胞微管的形态和细胞分裂过程也都没有影响。　　 CDCA4（cell division cycle associated4）是本实验室鉴定的一个新的NuMAP（Nuclear microtubule association protein）蛋白，它在细胞内的定位具有周期特异性。我利用pEGFP-N2载体构建了C端带有GFP标签的CDCA4融合蛋白，进一步确定了CDCA4间期定位于细胞核，分裂中期定位于纺锤体极的周期特异性定位。此外，还利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测了7株CDCA4 mAbs。　　 ANP32B（acidic（leucine-rich） nuclear phosphoprotein32 family，member B）是本实验室利用具有周期特异性染色的自身免疫病人血清筛选HeLa细胞cDNA表达文库时获得的一个候选NuMAP蛋白。但是GFP-ANP32B融合蛋白在细胞各周期时相的定位表明ANP32B并无周期特异性定位，因此它不是一个NuMAP蛋白。