氨氮胁迫对大口黑鲈相关器官及免疫因子的影响研究

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本实验采用96 h静水停食实验法,研究对象为体重(19.70±1.98)g的大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼,在水温为21.0℃、pH为7.9和溶解氧为8.0 mg/L的环境条件下,研究了不同氨氮浓度对其部分非特异性免疫指标的影响。急性毒性实验结果显示,大口黑鲈幼鱼的24、48、72、96 h总氨氮半致死浓度(LC50)分别为76.64、71.06、65.66和63.34 mg/L,安全浓度为6.33 mg/L。非离子氨LC50分别为2.48、2.30、2.12和2.05 mg/L,安全浓度为0.21 mg/L。根据总氨氮的96 h LC50,设置对照组(0 mg/L)和低(19 mg/L)、中(28.5 mg/L)、高(38 mg/L)4个处理组,进行0、6、12、24、48、72和96 h的氨氮胁迫。在不同时间点时分别取鳃、肝、肠、肾和脑器官样品,检测酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)的含量。分别于氨氮暴露后0、24、48、96 h和7 d随机取3尾鱼在冰上解剖,快速取每尾鱼相同位置的鳃丝、肾脏和肝脏,生理盐水冲洗干净组织,吸水纸吸干表面水分,波恩氏液避光固定,不同浓度无水乙醇逐梯度脱水,二甲苯溶液透明,常规石蜡包埋,切片机5μm切片,H.E染色后在倒置显微镜下观察和成像。研究表明,ACP、CAT(除肠部)酶活及MDA含量在96 h实验时间段内总体上均呈现先升高后逐渐降低的变化趋势,均与对照组有显著变化(P<0.05)。MDA(除肾48 h)均在12 h累积至最大值,随后逐渐降低。至96 h时各组织的高浓度组MDA含量均显著高于对照组(P<0.05);各组织中CAT在6-12 h,ACP在24-48 h达到峰值,随后逐渐下降。至96 h时ACP、CAT的中、高浓度组均分别显著高于和低于对照组(P<0.05)。表明尽管大口黑鲈的总氨氮96 h LC50为63.34 mg/L,但当氨氮浓度28.5 mg/L时经96 h的胁迫其部分器官中的细胞功能已经受到损伤。氨氮胁迫对大口黑鲈鳃、肝、肠、肾和脑器官产生损害,抑制免疫相关酶的活性,使得鱼体抗病能力及非特异性免疫能力下降,影响其正常生存。氨氮对大口黑鲈的相关免疫指标产生显著影响,ACP、CAT活性和MDA含量的变化可作为衡量大口黑鲈应对氨氮胁迫时受损害的特征性指标。38 mg/L氨氮浓度胁迫7 d情况下,大口黑鲈的鳃小片变粗、变短、融合、消失,严重影响鱼的呼吸功能。肾脏受损程度随时间延长增加,出现肾小球与肾小管大面积坏死,影响鱼的排泄功能。肝细胞空泡化、坏死,损害其代谢和解毒功能。通过观察鳃丝、肾脏、肝脏的组织切片确定大口黑鲈相关器官受氨氮胁迫的损伤程度,养殖过程中需要注意水质中氨氮浓度的监测,以防大口黑鲈养殖过程中受到氨氮的毒害。
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