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研究目的本实验是川芎嗪、辛伐他汀对高糖作用下人腹膜间皮细胞(HPMC)的干预实验,观察对腹膜纤维化有重要影响的Ⅰ型胶原及其主要降解酶系MMP-1和TIMP-1表达的变化,研究川芎嗪和辛伐他汀对人腹膜间皮细胞的保护作用机制,为腹膜纤维化的防治提供一定的理论和实验依据。研究方法来自于南京市鼓楼医院行腹腔外科手术的非尿毒症且非腹腔炎症捐赠者的正常大网膜组织,采用组织消化培养法,传代培养人腹膜间皮细胞,第三代细胞用于实验。实验将HPMC分为八组：N组即正常对照组—(RPMI1640培养液)、G组—(2.5%葡萄糖注射液)、S1组(辛伐他汀2.5μmol/L+葡萄糖注射液2.5%)、S2组(辛伐他汀5μmol/L+葡萄糖注射液2.5%)、S3组(辛伐他汀10μmol/L+葡萄糖注射液2.5%)、L1组(川芎嗪10mg/L+葡萄糖注射液2.5%)、L2组(川芎嗪20mg/L+葡萄糖注射液2.5%)、L3组(川芎嗪40mg/L+葡萄糖注射液2.5%),各组以含10%FCS的RPMI1640培养液(完全培养液)补充容量至200μL。以MTT检测细胞活性,ELISA、RT-PCR检测Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1在蛋白质、基因水平的表达。研究结果(1) HPMC培养与鉴定：分离培养的细胞,形态学特点是光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达95%以上；细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原阴性,证实分离培养的确是HPMC。(2)MTT检测细胞活性：高糖能降低人腹膜间皮细胞活力；辛伐他汀、川芎嗪干预下,HPMC MTT OD值显著高于高糖对照组(P<0.01),且其作用随着药物浓度增加而增强；可见辛伐他汀、川芎嗪均能抑制高糖所致的腹膜间皮细胞活力降低。(3) ELISA、RT-PCR检测胶原Ⅰ、MMP-1和TIMP-1在蛋白、基因水平的表达：HPMC在高糖作用下增加Ⅰ型胶原和TIMP-1的表达,而降低MMP-1表达；在辛伐他汀干预下,胶原Ⅰ、TIMP-1表达显著低于高糖对照组,而MMP-1表达明显增加(P<0.01),且抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01)；在川芎嗪干预下胶原Ⅰ、TIMP-1的含量明显下降(P<0.01),MMP-1含量也显著高于高糖对照组(P<0.01),也呈剂量依赖性；说明辛伐他汀、川芎嗪可能通过抑制胶原Ⅰ表达,同时调整MMP-1/TIMP-1表达起到抗HPMC纤维化的作用。结论1、在高糖作用下,HPMC细胞活力下降,胶原Ⅰ、TIMP-1表达增加,MMP-1表达下降。2、川芎嗪、辛伐他汀干预下间皮细胞活力有所恢复,胶原Ⅰ、TIMP-1表达明显减少,而MMP-1表达增加。3、川芎嗪、辛伐他汀可通过下调胶原Ⅰ的合成和分泌减少细胞外基质的沉积,也可能通过调节MMP-1/TIMP-1的平衡,促进胶原Ⅰ的降解,减少细胞外基质的沉积,发挥抗腹膜纤维化的作用。