研究背景:胰腺癌恶性程度极高,进展迅速,由于患者早期没有明显症状和体征,早期诊断存在较大困难。目前手术治疗仍是根治胰腺癌的主要手段,但多数胰腺癌患者诊断时已处于晚期,已丧失手术机会。即使有机会接受手术,术后患者预后仍不容乐观,五年生存率约为11%。因此明确胰腺癌的发生发展相关机制、早期对患者进行预后预判和选择有效的治疗方式,显得极为重要。本课题组基于前期研究发现,在预后不良的患者中存在一些高频突变基因,其中PPP1R13B为其中较为关键的分子,其表达的蛋白为 ASPP1（Apoptosis stimulating protein of P53 1,P53促凋亡蛋白1）,但其与胰腺癌的相关作用目前尚未见报道,因此,本研究旨在通过临床病理样本及信息分析ASPP1蛋白表达水平与胰腺癌患者预后之间的关系,同时通过细胞实验和动物实验明确ASPP1表达改变对胰腺癌恶性生物学行为的影响,最后通过转录组测序寻找可能的相关分子机制。方法:1.利用免疫组化染色技术,比较ASPP1蛋白在胰腺癌肿瘤组织和癌旁正常组织的表达情况,并同时分析ASPP1在胰腺癌组织中的表达水平与胰腺癌患者预后之间的关系。2.利用胰腺癌细胞系作为工具细胞,对ASPP1的表达水平进行调节,并通过检测细胞增殖、平板克隆形成、细胞迁移、细胞耐药实验、细胞周期和细胞凋亡等细胞表型实验明确ASPP1表达水平对胰腺癌恶性生物学行为的影响。通过构建裸鼠皮下移植瘤模型,在体内水平验证肿瘤细胞成瘤及增殖能力。3.利用转录组测序技术,寻找ASPP1表达改变后的表达差异基因,并通过对差异基因富集分析,寻找下游可能的分子机制。4.利用western blot、qRT-PCR和流式技术对通过转录组分析得到的相关机制进行验证。结果:1.ASPP1在癌旁正常组织中的表达水平明显高于其在胰腺癌肿瘤组织中的表达水平（配对和非配对比较）,并且ASPP1高表达组患者的预后明显优于ASPP1低表达组患者,提示ASPP1高表达是胰腺癌患者预后的保护因素。2.选用AsPC-1、MIAPaCa-2作为工具细胞,对ASPP1的表达水平进行调节,发现在ASPP1敲低后,可促进胰腺癌细胞的细胞增殖、平板克隆形成能力、增加胰腺癌细胞对吉西他滨的耐受性、抑制细胞凋亡、调控影响细胞周期,但不影响胰腺癌细胞的迁移能力,并在裸鼠皮下移植瘤模型中验证了其对增殖的影响。3.通过转录组测序,将差异基因进行富集分析,发现在ASPP1表达下调后,主要影响的是DNA损伤修复和细胞周期相关通路。并对差异基因在相关通路中的基因的表达情况进行分析,发现两组差异明显。4.通过western blot和qRT-PCR验证在ASPP1敲低后,细胞周期相关的蛋白和基因表达确实发生改变。并通过细胞同步化,再次明确ASPP1敲低后确实可调控细胞周期。并且发现ASPP1敲低后,磷酸化Rb蛋白水平增加,E2F转录因子mRNA表达水平增加。结论:1.ASPP1在正常组织中的表达水平明显高于其在胰腺癌肿瘤组织中的表达水平,且其在肿瘤组织中的表达水平与胰腺癌患者预后相关。2.ASPP1表达下调后可在体内及体外水平促进胰腺癌增殖,并可影响胰腺癌细胞对吉西他滨治疗的敏感性,影响细胞周期及细胞凋亡等细胞表型。3.转录组测序发现ASPP1表达水平改变的差异基因富集于DNA损伤修复和细胞周期相关通路。4.细胞同步化后,ASPP1可调控细胞周期,并影响细胞周期相关蛋白和基因的表达水平。其可能通过影响磷酸化Rb蛋白水平,使游离E2F转录因子水平增加,从而促进增殖。