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金雀异黄素是富含于豆科植物中的一种异黄酮,结构与哺乳动物雌激素类似,是大豆及其制品中含量最高、活性最强的一种植物雌激素。一方面,金雀异黄素通过各种途径富集于水体,使鱼类暴露其中;另一方面,以植物蛋白为主要原料的饵料也含有大量的金雀异黄素,造成鱼类面临水体和食料的双重污染。目前,有关金雀异黄素对鱼类影响的研究仍然较少。初步研究认为,金雀异黄素可从多个方面干扰鱼类的生长、生殖和正常行为。但现有结果还存在许多分歧,不能充分说明金雀异黄素对鱼类生长发育、生殖遗传及行为等的影响模式和作用机理,值得从多个层次进行广泛而深入的研究。本文选用金雀异黄素作为实验药品,以个体较小,实验室易饲养的金鱼为实验动物,通过腹腔注射的方式,分别将金鱼以0.2、2和20μg/g的金雀异黄素处理7天。检测了金雀异黄素对金鱼卵黄原蛋白的诱导和血清性激素水平的影响,以证明金雀异黄素作为一种弱雌激素对金鱼产生的雌激素效应。另外,在渔业生产和鱼类养殖中,金雀异黄素对鱼类正常生长和营养价值的影响也受到关注,所以本文对金鱼消化酶、抗氧化酶活性进行了测定,为了解金雀异黄素对鱼类生理生化状况的影响提供基础资料和参考。研究结果表明:(1) 0.2、2和20μg/g金雀异黄素腹腔注射处理金鱼7天,将各处理组血清进行常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE),经糖蛋白、磷蛋白和脂蛋白染色后,确定了金雀异黄素对雄性金鱼VTG的诱导作用,并通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测发现该VTG具有2个蛋白亚基,分子量分别为130kDa和83kDa。另外,经放射性免疫分析发现,处理组雄性金鱼血清睾酮含量下降,雌二醇含量上升,而且以2μg/g组变化最为明显,进一步证明了金雀异黄素对金鱼的雌激素效应。(2)金雀异黄素处理7天,各浓度处理组金鱼肝脏和肠道蛋白酶和淀粉酶活力均比对照组下降,其中2μg/g组显著下降(P<0.05),20μg/g组极显著下降(P<0.01)。小肠碱性磷酸酶活力0.2μg/g暴露组即显著下降,其它两组出现极显著下降现象。表明金雀异黄素显著降低了金鱼主要消化酶的活性,并可能由此对金鱼的生长造成负面影响。(3)分别在注射金雀异黄素后的第1天、第2天、第4天和第7天对金鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量进行了测定。结果显示,MDA含量随暴露时间的延长而增加,SOD活性在暴露的第4、7天显著和极显著升高,CAT和GST活性在暴露的初始即显著升高。表明金雀异黄素对金鱼造成了氧化损伤,并引起了机体抗氧化酶活性升高的应激反应。综上所述,本文通过Native-PAGE和SDS-PAGE的检测方法,确定了金雀异黄素作为一种与雌二醇结构类似的植物雌激素物质对雄性金鱼VTG的诱导作用,并通过对金鱼血清睾酮和雌二醇含量的测定进一步验证了其雌激素效应。另外,金雀异黄素可显著降低金鱼主要消化酶的活性,还可造成鱼体氧化损伤,表明金雀异黄素可以影响金鱼生长和正常的生理功能。