【摘 要】
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近年来,用手性技术不对称催化合成手性化合物及其手性中间体已经引起了学术界和企业界的重视,成为研究开发的热点。利用生物不对称催化具有反应条件温和、转化率高及立体选择性
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近年来,用手性技术不对称催化合成手性化合物及其手性中间体已经引起了学术界和企业界的重视,成为研究开发的热点。利用生物不对称催化具有反应条件温和、转化率高及立体选择性好等优点,已经成了诸多手性合成方法的首选。氧化还原酶是在生物催化手性合成中起着重要应用的一类酶。大部分氧化还原酶的催化反应需要辅酶NADPH作为还原剂参与,由于氧化还原酶应用广泛而NADPH价格昂贵,因此NADPH的再生在生物催化中起着重要的作用。另一方面,辅酶NADPH的再生能简化产物的分离,促使反应向正反应方向移动。现已有的NADPH再生方法包括酶法,电化学以及光化学方法等等。本论文是在前期以整体细胞不对称生物催化的基础上研究NADPH的再生,主要是以光合细菌作为实验材料,通过提取菌绿素、载色体,分离纯化氢化酶、氧化还原酶,构建了四种辅酶再生体系,以期实现在生物不对称催化中能够进行NADPH的再生,从而为辅酶依赖性的生物催化体系提供理论基础和方法指导。 其主要内容如下: (1)从类球红杆菌中提取出的菌绿素作为光敏剂光解水从而实现辅酶NADPH的再生,通过对再生体系所必需的条件实验,分析了利用菌绿素进行辅酶再生的机理,并且考察了辅酶再生的各个因素,得出再生NADPH的最佳条件为:pH7.0,温度为35℃,NADP+的初始浓度为50μmol/L,反应的最佳时间12h,电子供体和氢供体的浓度分别为10mmol/L和10mmol/L。 (2)从类球红杆菌其提取出的载色体通过光电子传递链实现辅酶NADPH的再生。通过对再生体系所必需的条件实验,分析了利用载色体进行辅酶再生的机理。并且考察了辅酶再生的各个因素,得出再生NADPH的最佳条件为:pH7.0,温度为35℃,NADP+的初始浓度为50μmol/L,反应的最佳时间12h,电子供体和氢供体的浓度分别为10mmol/L和10mmol/L。 (3)从类球红杆菌中分离纯化出的氢化酶催化氢气产生电子和氢质子,从而实现辅酶NADPH的再生。通过对再生体系所必需的条件实验,分析了利用氢化酶进行辅酶再生的机理。并且考察了辅酶再生的各个因素,得出再生NADPH的最佳条件为:pH7.0,温度为30℃,NADP+的初始浓度为50μmol/L,反应的最佳时间3h。 (4)从类球红杆菌中分离纯化的氧化还原酶共底物催化,从而实现辅酶NADPH的再生。通过对再生体系所必需的条件实验,分析了利用氧化还原酶进行辅酶再生的机理。并且考察了辅酶再生的各个因素,得出再生NADPH的最佳条件为:pH7.5,温度为30℃,NADP+的初始浓度为50μmol/L,反应的最佳时间3h,葡萄糖和ATP的浓度分别为4.5g/L和11.5g/L。 (5)通过对不同的芳香酮类、脂肪酮化合物为底物进行了酶法还原,检测其反应的还原产率和e.e值,结果表明该酶催化的底物适用范围很广;酶对电负性强的基团在苯乙酮α位取代的衍生物以及五碳脂肪酮的专一性较强;酶催化的立体选择性都在99%以上,具有极高的立体选择性。
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