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第一部分24例Wiskott-Aldrich综合征临床特征与分子特点分析目的:探讨来自中国23个不同家系的24例Wiskott-Aldrich综合征患儿的临床特征及分子特点。方法:2007年4月～2009年7月收集在重庆医科大学附属儿童医院治疗的24例疑诊Wiskott-Aldrich综合征患儿外周静脉血,采用流式细胞术(FCM)检测患儿外周血单个核细胞(PBMC)中WASP表达。扫描电镜观察患儿外周血淋巴细胞形态。PCR扩增WASP基因序列并直接双向测序分析24例患儿及亲属基因突变情况。总结确诊WAS患儿的临床资料。结果:24例患儿均为男性,具有典型WAS的临床特征。其中2例发生自身免疫性溶血性贫血(AIHA),1例患视网膜母细胞瘤(RB)。5例淋巴细胞扫描电镜(SEM)检查可见典型微绒毛异常。21例患儿采用FCM检测外周血PBMC的WASP表达,18例患儿WASP不表达,3例WASP部分表达。WASP基因分析在23例患儿中发现20种不同突变,包括错义突变5例,无义突变4例,缺失突变4例,插入突变3例,拼接位点突变6例,复合突变1例。其中新型突变7例。突变分布于WASP基因7个外显子和4个内含子。1例WAS患儿在WASP基因编码区未发现基因突变。3例WASP部分表达患儿WASP基因分析发现1例WASP基因第二位点突变。22例明确基因诊断的患儿的母亲及相关亲属进行WASP基因检测,在20个家系中发现23例WASP基因突变携带者。5例WAS患儿接受造血干细胞移植,移植后5例均正常表达WASP,但1例死于爆发性巨细胞病毒感染。结论:通过对24例WAS患儿基因分析,发现7个新型WASP基因突变位点。在中国人群中报道1例WASP基因第二位点突变。FCM检测和WASP基因分析能确诊并检出携带者,有利于WAS患儿的及时治疗和相关的遗传咨询。第二部分21例先天性无丙种球蛋白血症的临床特征和分子特点目的:分析和探讨21例先天性无丙种球蛋白血症患儿的临床特征及分子特点。方法:2008年3月～2010年2月收集在重庆医科大学附属儿童医院就诊的21例先天性无丙种球蛋白血症患儿及亲属外周静脉血,采用RT-PCR扩增BTK基因序列并直接双向测序分析患儿及亲属基因突变情况。对未发现BTK基因突变的患儿进一步采用PCR扩增常染色体隐性遗传无丙种球蛋白血症的相关基因,包括μHc,λ5,Igα和Igβ。收集21例先天性无丙种球蛋白血症患儿的临床资料。结果:21例先天性无丙种球蛋白血症患儿起病年龄0.9±0.5岁,诊断年龄6.3±3.0岁。呼吸道感染是最常见的临床表现(n=20, 95.2%),其它依次为关节炎(n=8, 38.1%),中耳炎(n=8, 38.1%),腹泻(n=6, 28.6%),皮肤感染(n=6, 28.6%)和脑膜脑炎(n=1, 4.8%)。1例患儿发生前B细胞白血病,2例患儿因反复肺炎进展为慢性肺疾病。BTK基因分析在18例患儿中发现16种不同突变,其中包括7种新型突变(del 373-441, 504 del G, 537 del C, 851 del A, 1637 G>A, 1879 T>C, del 1482-1882)。突变类型包括缺失突变6例,错义突变4例,无义突变3例,拼接位点突变5例。3例患儿未见BTK基因突变。18例BTK基因突变中10例位于酪氨酸激酶区,4例位于血小板-白细胞C激酶底物同源区,3例位于Src同源区3,1例跨越酪氨酸激酶同源区、Src同源区3、Src同源区2和酪氨酸激酶区。对BTK基因未见突变的3例患儿进行常染色体隐性遗传无丙种球蛋白血症的相关基因筛选,发现1个μHC基因的复合突变(1956 G>A, 170-175 insert C)。结论:通过对21例中国先天性无丙种球蛋白血症患儿分子特点分析,发现7个BTK基因的新型突变。在中国人群中首次报道μHC基因突变的临床特征。基因分析有助于先天性无丙种球蛋白血症患儿的明确诊断,有利于发现携带者和进行遗传咨询。第三部分IL-7Rα基因缺陷导致严重联合免疫缺陷病和Omenn综合征的临床特征和分子特点目的:探讨IL-7Rα基因缺陷导致严重联合免疫缺陷病和RAG1基因突变导致Omenn综合征的临床特征和分子特点。方法: 2008年2月～11月在重庆医科大学附属儿童医院收治3例男性患儿,均在生后早期出现反复、严重的感染,抗生素治疗效果较差。其中2例患儿全身反复出现大片红色斑丘疹、脱屑及肝脾肿大。采用PCR方法扩增患儿及父母IL-7Rα基因和RAG1/RAG2基因,PCR产物直接进行双向序列测定。采用25个TCRVβ亚家族的特异性正向引物和1个共同的Cβ反向引物扩增TCRVβ进行克隆谱型分析。采用STR分析除外母源性T细胞植入。结果:患儿1的免疫球蛋白IgG 686.7mg/dL,IgA 24.9 mg/dL,IgM 20.6 mg/dL, IgE 2.3IU/ml。淋巴细胞分类T淋巴细胞(CD3+) 0,B淋巴细胞(CD19+)58%,NK细胞(CD16+CD56+)42%。基因分析患儿为IL-7Rα基因的复合杂合突变(638 C>T;IVS4(+1)G>A),父母均为携带者。第4内含子剪接位点突变(IVS4(+1)G>A)为首次报道的突变类型。RT-PCR检测发现患儿IL-7RαmRNA表达明显降低。患儿IL-7RαcDNA经巢式PCR扩增并进行T-A克隆,测序发现外显子4出现64个核苷酸缺失(496-559 del, K158fsX160)。患儿2的免疫球蛋白IgG 1150mg/dL,IgA 80mg/dL,IgM 180mg/dL,IgE 5.4IU/ml。淋巴细胞分类T淋巴细胞(CD3+) 69%,B淋巴细胞(CD19+)3%,NK细胞(CD16+CD56+)27%。患儿3免疫球蛋白IgG 4847mg/dL(IVIG后),IgA 46mg/dL,IgM 129 mg/dL,IgE 1.2IU/ml。淋巴细胞分类T淋巴细胞(CD3+)21%,B淋巴细胞(CD19+)1%,NK细胞(CD16+CD56+)69%。PHA刺激后患儿2和3淋巴细胞增殖均极度低下。STR分析除外患儿2和3母源性T细胞植入可能。RAG1基因组DNA测序发现患儿2为RAG1基因的复合突变(G1983A, R624H; C2444T, R778W)。患儿3为RAG1基因的纯合缺失突变(del2302, I729X)。TCRVβ克隆谱型分析显示患儿2的25个TCRVβ亚家族均为单克隆或寡克隆,患儿3的14个TCRVβ亚家族为单克隆或寡克隆,11个TCRVβ亚家族极弱或缺失。结论:在中国人群中首次报道了2例明确基因诊断的Omenn综合征和1例IL-7Rα基因缺陷导致严重联合免疫缺陷病的临床特点和基因突变类型,发现1个RAG1基因和1个IL-7Rα基因的新型突变。