大白菜橙色叶球基因分子标记及杂种纯度鉴定研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pan07631014
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本研究以大白菜196个F2群体为试材,采用混合分组分析法(BSA),进行了大白菜橙色叶球性状连锁的分子标记的筛选,通过196个F2单株验证,最后筛选得到S82-591标记,并进一步将RAPD标记转化为SCAR标记。同时以大白菜“金冠2号”和“冠春”杂交种及其父母本为研究材料,分别建立“金冠2号”和“冠春”的DNA指纹图谱及其杂种纯度鉴定技术。为利用分子标记进行大白菜橙色叶球辅助选择育种提供了依据。为“金冠2号”和“冠春”杂种高效推广提供了技术保障。主要结果如下:1.以4套大白菜普通白色株系及橙色株系及其杂交后代F1、F2、BC1为试材,通过结球期球色分离分析,证实大白菜叶球橙色性状为一对隐性基因控制的简单遗传。2.摸索了大白菜DNA的提取方法。所获DNA完整,其质量较高,能获得稳定可靠的PCR结果。3.利用以F2群体和F3家系构建的橙色叶球混合池和白色叶球混和池筛选了400个10碱基引物,用在两混和池间有差异条带的引物在混和池的单株验证,发现引物S82(GGCACTGAGG)产生的分子量为591bp的条带为大白菜橙色叶球特异标记,在白色单株中为扩增出。重复3次,结果一致。进一步用引物S82对F2群体进行扩增,连锁分析,S82-591与橙色叶球基因的遗传距离为3.7cM。4.回收特异片段S82-591,克隆、测序。根据测序结果,设计一对19碱基特异引物。对F2群体的196个单株进行扩增,其结果与RAPD标记S82-591在F2群体分离完全一致,表明S82-591标记已成功地转化为SC82-591标记。5.从320条引物中筛选“冠春”应用于种子纯度鉴定的引物6条,其中2条偏母本引物、1条偏父本引物、2条互补引物及1条特异引物。根据大白菜种子单收和混收的不同情况,提出了3套种子纯度鉴定方案,通过混收种子的检验,证实了其可行性和适用范围。6.成功地将RAPD标记S134-1200和S266-260转化为SCAR标记,其对“冠春”杂种及其亲本的鉴定结果与大田表现型相一致,可用应用于“冠春”杂种的鉴定。7.从200条引物中筛选适用于“金冠2号”种子纯度鉴定的引物4条,其中2条偏母型引物和2条偏父本引物。成功地将2个RAPD标记S219-1200和S351-500转化为SCAR标记,并且对“金冠2号”杂种及其亲本的检测结果与大田表现型相一致。
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