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目的1、PLCε和HIF-1α在前列腺癌组织及前列腺增生组织中的差异表达及其与临床各病理参数的关系;前列腺癌患者血清中HIF-1α的表达及其与临床各病理参数的关系。2、PLCε通过HIF-1α信号调节前列腺癌细胞的糖酵解。3、PLCε通过HIF-1α调节前列腺癌细胞的能量代谢后促进前列腺癌细胞的迁移。4、PLCε调节HIF-1α表达的机制。方法1、采用免疫组织化学染色法(IHC)检测42例前列腺癌组织及前列腺增生组织中PLCε和HIF-1α的表达;ELISA检测56例前列腺癌患者血清中HIF-1α的表达;并分析其与临床各病理参数的关系。2、采用sh-PLCε慢病毒,构建前列腺癌细胞稳定低表达PLCε;利用葡萄糖消耗和乳酸生成实验检测糖代谢活性;qRT-PCR及Westernblot检测前列腺癌细胞株中HIF-1α、GLUT1、PKM2、HK2、LDHA的表达。3、Transwell实验检测前列腺癌细胞株的迁移能力,western blot检测迁移相关分子(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail、MMP2、MMP9)的表达。4、双荧光素酶报告实验检测HIF-1α的转录活性;采用ERK/MEK信号通路的激动剂(Honokiol)和抑制剂(SCH772984)作用于前列腺癌细胞株(PC3和LNcap)后,qR-TPCR及Western blot检测HIF-1α、GLUT1、PKM2、HK2、LDHA的mRNA及蛋白的表达;免疫荧光及核浆蛋白western blot检测HIF-1α的核转位;采用蛋白酶抑制剂(MG-132)及si-pVHL作用于PC3细胞后,western blot检测HIF-1α的蛋白降解。结果1、PLCε和HIF-1α在前列腺癌中均高表达,二者成正相关(r=0.3285,p=0.0337);PLCε和HIF-1α的高表达皆与Gleason分级有关(P<0.01,P<0.05);前列腺患者血清中HIF-1α高表达与肿瘤的转移相关。2、sh-PLCε抑制前列腺癌细胞株的葡萄糖消耗和乳酸生成,western blot和qRT-PCR结果显示:sh-PLCε抑制PKM2、GLUT1、LDHA、HK2和HIF-1α的表达;si-HIF-1α抑制前列腺癌细胞株的糖酵解及其相关分子的表达。3、通过Transwell实验检测前列腺癌细胞的迁移,结果表明sh-PLCε+si-HIF-1α组比单独sh-PLCε组和si-HIF-1α更显著地抑制前列腺癌细胞的迁移(P<0.01);Western blot检测迁移相关蛋白(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail、MMP2、MMP9)的表达情况,结果表明sh-PLCε通过HIF-1α抑制前列腺癌细胞的迁移。4、sh-PLCε通过mTOR和MEK/ERK信号通路抑制HIF-1α的表达;Western blot结果显示:与对照组相比sh-PLCε组中p-mTOR,p-S6K,p-4EBP,p-MEK和p-ERK的蛋白表达量明显降低;sh-PLCε+SCH772984组比单独使用sh-PLCε组和SCH772984组中p-ERK,HIF-1α,PKM2,GLUT1,LDHA和HK2的表达量低;sh-PLCε+Honokiol组可逆转sh-PLCε的作用;双荧光素酶报告实验显示:sh-PLCε通过MEK/ERK信号通路抑制HIF-1α对其下游靶基因的转录调控作用;免疫荧光实验和Western blot结果显示:sh-PLCε可抑制HIF-1α在细胞核中的表达;同时sh-PLCε与si-pVHL连用可逆转sh-PLCε对HIF-1α的下调作用。结论1、PLCε和HIF-1α在前列腺癌中的表达呈正相关;HIF-1α可能是一个用以评估前列腺癌的预后的标志物。2、PLCε调节前列腺癌细胞的能量代谢,HIF-1α在此起关键作用。3、PLCε调节的能量代谢最终促进了前列腺癌细胞的迁移能力。4、PLCε通过mTOR和MEK/ERK信号通路调节HIF-1α;PLCε调节HIF-1α的核转位;PLCε调节HIF-1α的蛋白降解过程有赖于VHL。