枳椇子和水飞蓟配伍对酒精性肝损伤大鼠肝细胞线粒体的保护作用和机理探讨

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酒精性肝损伤(Alcoholic liver disease, ALD)是由不健康饮酒导致的肝脏损害,我国是酒精消费大国,随着社会的进步和文明的发展,酒精的滥用已发展成继病毒之外导致肝损害的最大病因之一,由酒精引起的肝脏损害逐渐引起人们的重视。有研究发现,酒精性肝病患者出现异常免疫反应和细胞基因异常调控,探查到肝细胞线粒体肿胀,功能下降,甚至线粒体DNA的复制受到抑制,线粒体数目和线粒体生物合成能力明显下降,导致细胞凋亡的发生。可见线粒体在酒精性肝病的发生和发展过程中起到了举足轻重的作用,我们应该将目光更多的放在酒精对线粒体的损伤机制当中,把肝细胞线粒体当做研究的重点目的:一方面以枳棋子与水飞蓟配伍保护酒精性肝损伤大鼠肝细胞线粒体为研究内容,探讨二者配伍后能否产生“1+1>2”的协同作用,为配伍理论提供现代科学研究数据。第二为酒精性肝损伤的临床辨证诊治、遣方用药提供科学价值指导,以便研发院内制剂和后续研究提供实验数据。方法:本课题采用酒精灌胃的方法复制酒精性肝损伤的模型,分别观察了单味水飞蓟和单味枳棋子及其配伍组对酒精性肝损伤大鼠肝脏各项指标的影响。以生物学、酶组织技术和组织形态学为主要方面来阐述比较单位枳棋子和水飞蓟及其配伍组对酒精性肝损伤线粒体的保护作用和作用机制。指标与结果:1对酒精性肝损伤大鼠体重及肝指数的影响:模型组与空白组对比,肝指数显著增加(P<0.01),各个给药组中水飞蓟组、枳椇子组、和1:2组大鼠肝指数明显低于模型组且具有统计学差异,2:1组肝指数低于其他配伍组,且具有统计学差异。2对酒精性肝损伤大鼠血清转氨酶活性的影响:模型组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸(AST)均显著高于空白组,各个给药组与模型组对比均低于模型组且具有统计学差异。但各给药组之间的ALT、AST值相比较,并没有发现哪组效果突出。3对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理改变的影响:单味水飞蓟组、单味枳棋子组及其配伍组均能有效改善酒精性肝损伤大鼠肝组织的脂肪变性和炎症改变,减轻酒精对肝细胞的损伤。其中水飞蓟和枳棋子配伍2:1组与水飞蓟和枳棋子配伍1:1组效果明显好于其他组且具有统计学差异。4对酒精性肝损伤大鼠肝组织细胞线粒体开放性肝细胞渗透性运转通道(PTP)的检测:模型组大鼠肝组织细胞线粒体PTP开放,导致线粒体肿胀,540nmn处吸光度值A540减少(P<0.01),明显低于空白组,各个给药组与模型组相比均明显低于对照组且具有统计学差异。其中水飞蓟和枳棋子配伍1:1组与水飞蓟和枳棋子配伍2:1组效果好于其他组且具有统计学差异。5对酒精性肝损伤大鼠肝组织细胞线粒体跨膜电位△Ψm的测定:模型组大鼠肝组织细胞线粒体跨膜电位AΨm明显低于其他各组,(P<0.01)。配伍组跨膜电位要显著低于单味药组,其中水飞蓟和枳椇子配伍2:1组要跨膜电位低于其他配伍组,具有统计学差异。6对酒精性肝损伤大鼠肝组织细胞钙离子(Ca2+)i的测定:采用50%乙醇灌胃的方法复制酒精性肝损伤模型,模型组大鼠肝组织细胞(Ca2+)i显著高于空白组,(P<0.01)。配伍组(Ca2+)i显著低于单味药组,其中水飞蓟组合枳棋子配伍2:1组(Ca2+)i要低于其他配伍组,具有统计学差异。结论:1枳棋子和水飞蓟配伍组对酒精性肝损伤大鼠肝脏细胞的保护作用优于单味水飞蓟和单味枳椇子。其中,枳棋子和水飞蓟配伍2:1组的作用最佳。2枳棋子和水飞蓟可能是通过调节线粒体渗透性转运通道,稳定线粒体膜电位来起到对酒精性肝损伤大鼠肝组织的保护作用,以阻止肝细胞凋亡的发生。
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