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鳢科鱼类营养丰富、易于饲养,是我国一类重要的淡水养殖鱼类;杂交鳢是由斑鳢(Channa maculata♀)×乌鳢(C.argus♂)种间杂交获得,其生长迅速、抗病力强、易于驯食、且耐长途运输,近些年人工养殖发展迅猛。但高密度集约化池塘养殖模式下,高脂、高蛋白的人工配合饲料喂养及养殖水环境的恶化,导致其病害频发。舒伯特气单胞菌是近年来引起鳢内脏类结节病的一种新兴病原,因其发病急,死亡率高,宿主专一性强,对鳢养殖造成了较大危害。目前,针对该细菌病的防治还主要集中在采用抗菌药物抑杀病原菌,由此造成的环境污染及细菌耐药性问题对水产养殖业乃至整个生态环境都存在巨大隐患。疫苗作为一种高效、环保的生物制品,是防控病原微生物引发的各类疾病的重要手段;舒伯特气单胞菌作为鱼类病原菌,国内外还尚未见关于该菌疫苗研究的相关报道;本论文在筛选鉴定得到4株杂交鳢源舒伯特气单胞菌的基础上,对其生理生化特性和致病性进行分析,并对其中2株进行了灭活疫苗的制备及免疫保护效果的评价,可为水产动物舒伯特气单胞菌病的防治提供依据。以杂交鳢和分离保存的舒伯特气单胞菌为实验对象,运用生理生化特性测试、改良平板法检测、微量二倍稀释法、PCR扩增及测序分析、人工注射感染等方法,比较分析了4株杂交鳢源舒伯特气单胞菌的生物学特性和致病性。结果显示,4株菌株理化特性基本相同,16S rRNA和gyrB基因一致性分别为100%和99.57%,聚类分析聚为一簇;不同的舒伯特气单胞菌(WL-4、ZL-1、ZL-13、D075)均具有溶血性、蛋白酶活性和脂肪酶活性,同时携带有hlyA、ela、lip、ahal、aer等毒力基因;4株菌株对杂交鳢致病性存在差异,1.2×10~5 CFU/mL浓度腹腔注射感染健康杂交鳢,WL-4、ZL-1、ZL-13、D075对杂交鳢的感染致死率依次为30%、40%、70%和80%;不同杂交鳢源舒伯特气单胞菌菌株的药物敏感性以及携带的耐药基因也存在差异。筛选致病性较强和胞外产物分泌较多的菌株D075和WL-4,采用0.2%的甲醛制备细菌灭活疫苗;注射免疫实验鱼后定期采样,检测分析实验组与对照组之间外周血血细胞指标、非特异免疫指标、血清中抗体效价以及抗感染免疫保护率等,结果显示,D075及WL-4菌株制备的灭活疫苗均可引起杂交鳢非特异性和特异性免疫应答,但免疫效果存在差异;与对照组相比,免疫0-4周内,WL-4免疫杂交鳢外周血白细胞数目(RBC)、血红蛋白含量(HGB),血清中溶菌酶(LZM)、一氧化氮(NO)含量、碱性磷酸酶(AKP)、氧化酶(POD)等活力提高更显著;D075与WL-4疫苗免疫保护效果均在第4-12周内达到高峰,最高免疫保护率可分别达40%和56%,12周后均呈现下降趋势;WL-4与D075之间存在交叉免疫保护,12周时交叉保护率分别为50%(WL-4免疫,D075攻毒)和44%(D075免疫,WL-4攻毒)。使用WL-4菌株制备甲醛灭活疫苗,比较分析免疫剂量和免疫次数对舒伯特气单胞菌灭活疫苗免疫保护效果的影响,结果显示,不同浓度的疫苗免疫58.3±5.4 g的杂交鳢时,10~9 CFU/mL的免疫效果最好,一次免疫接种2周后,相对免疫保护率为39%,2-4周相对免疫保护率逐渐上升,8-12周相对免疫保护率呈现波动,12周时免疫保护率最高达78%,28周时疫苗相对免疫保护率降为0;免疫鱼血清的抗体效价水平与相对免疫保护率存在相关性,抗体效价最高为1:512时免疫保护率为78%;在10~9 CFU/mL一次免疫4周后,取剩余半数杂交鳢以相同剂量进行二次免疫,二次免疫8周后免疫保护率为12%,显著低于12周时10~9 CFU/mL一次免疫保护效果,二次免疫时间及免疫剂量选择不当会对舒伯特气单胞菌疫苗免疫保护效果产生负面影响。不同杂交鳢源舒伯特气单胞菌具有基本一致的生物学特性,但在致病性及药物敏感性方面存在差异;不同菌株制备的全菌灭活疫苗引起的杂交鳢非特异性及特异性免疫反应存在差异,但亦存在交叉免疫保护;恰当的免疫剂量和免疫次数均与全菌灭活疫苗的免疫保护效果密切相关。舒伯特气单胞菌灭活疫苗的菌株选择、最适免疫剂量、二次免疫时间等均有待进一步的深入研究。