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免疫器官由中枢免疫器官和周围免疫器官两部分组成,其中中枢免疫器官包括骨髓和胸腺。骨髓是T淋巴细胞的出生地,骨髓的重要功能就是生成各种细胞的干细胞,这些干细胞通过分化再生成各种血细胞如红细胞、白细胞、血小板等,因此,骨髓不但是造血器官,对于维持机体的生命和免疫力也非常重要。为探索绵羊妊娠早期对中枢免疫器官骨髓的影响,本试验以繁殖机能正常的绵羊为试验动物,研究妊娠早期绵羊骨髓表达ISG15和PIBF因子的的变化规律。首先对绵羊埋植孕激素海绵栓,进行同期发情处理,进而试情并配种(对照组不配种)。然后采集发情后第16天未配种的,以及配种后第13、16和25天妊娠的绵羊骨髓(通过屠宰解剖,确定配种后第13、16和25天妊娠的绵羊,即看到孕体的存在)。将不同妊娠天数的骨髓分别置于2mL冷冻管中保存在-196℃液氮中,带回实验室检测mRNA的表达和蛋白印迹分析。另外采集不同妊娠天数的绵羊骨髓,用PBS液冲洗后将骨髓块放入4%多聚甲醛的PBS溶液中固定,用于免疫组织化学检测。得到了如下结果:1、利用实时荧光定量PCR法检测和蛋白印迹分析发现,妊娠早期绵羊骨髓中的ISG15 mRNA和蛋白的表达量从未妊娠到妊娠期逐渐升高,ISG15 mRNA和蛋白在妊娠16天羊骨髓中的表达量高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表达量达最高。然后,到妊娠25天表达量则会逐渐降低。通过免疫组织化学检测确认,ISG15蛋白在妊娠16天羊骨髓中的染色强度高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天,而且主要在骨髓间质的细胞质表达。总之,绵羊妊娠早期ISG15 mRNA和蛋白表达量的增加与孕体来源的干扰素tau有关。2、mRNA和蛋白水平进行了PIBF因子表达的检测,证明在妊娠16天羊骨髓中mRNA的表达量高于未妊娠16天,妊娠13天和妊娠25天。而且在妊娠16天表达量达最高。然而,到妊娠25天mRNA表达量则会逐渐降低,蛋白水平的表达与mRNA水平的表达基本一致,在妊娠13天、妊娠16天和妊娠25天羊骨髓中的表达,在未妊娠16天的骨髓中不表达。妊娠16天和25天骨髓PIBF蛋白的表达量显著高于妊娠13天,妊娠16天和妊娠25天的骨髓中PIBF蛋白的表达明显,基本没有差异。总之,在绵羊妊娠早期,孕体来源的干扰素tau通过血液循环,作用于骨髓,使骨髓间质的细胞上调表达ISG15 mRNA和蛋白;同时结果表明,妊娠早期PIBF也上调表达,可能是干扰素tau通过血液循环抑制黄体的退化,使黄体持续产生孕酮,从而诱导PIBF蛋白上调表达,调节骨髓的免疫功能,使绵羊胚胎免受母体免疫系统的排除,有利于妊娠的继续。