【摘 要】
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目前牛的商品化冻精中含有较多能影响精子体外获能的成分,例如抗冻剂等;在精子体外获能之前,需先对解冻的精液进行必要的分离纯化,去除各种添加剂,为精子体外获能提供最优环境。因此,研究不同精子纯化方法对体外受精的影响、确定最优精子纯化方法以期提高体外胚胎生产效率具有重要意义。同期发情处理是胚胎移植过程中的关键一环,受体牛的发情同步及黄体质量会直接影响胚胎移植后的受胎率。本研究选取前列腺素和孕酮两种外源生
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（编号:31972572）；
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目前牛的商品化冻精中含有较多能影响精子体外获能的成分,例如抗冻剂等;在精子体外获能之前,需先对解冻的精液进行必要的分离纯化,去除各种添加剂,为精子体外获能提供最优环境。因此,研究不同精子纯化方法对体外受精的影响、确定最优精子纯化方法以期提高体外胚胎生产效率具有重要意义。同期发情处理是胚胎移植过程中的关键一环,受体牛的发情同步及黄体质量会直接影响胚胎移植后的受胎率。本研究选取前列腺素和孕酮两种外源生殖激素,以荷斯坦母牛为试验对象,研究不同同期方案对胚胎移植受体牛的影响,以期提高受体母牛的利用率及胚胎移植后的受胎率。试验一:不同精子纯化方法对牛体外胚胎生产的影响本试验选择Percoll密度梯度离心法和上浮法处理冻精,再与体外成熟后的卵母细胞进行受精,重复8次,统计精子活力、精子密度、受精率、卵裂率和囊胚率。试验结果表明,Percoll法处理后的精子活力（0.65）与上浮法处理后（0.68）无显著差异（p>0.05）,但两组均显著高于未处理的精子活力（0.41）（p<0.05）;Percoll组精子密度（9.08×10~6/m L）显著高于上浮组（7.60×10~6/m L）（p<0.05）。Percoll组受精率（83.70%）和卵裂率（62.61%）显著高于上浮组（77.99%vs 51.62%,p<0.05）;Percoll组囊胚率（31.18%）与上浮组囊胚率（30.94%）无显著差异（p=0.06）。试验二:不同同期发情方法对受体牛胚胎移植的影响选择90头健康、膘情适中的荷斯坦青年牛,随机分为两组,分别按照CIDR+PG和PG+PG同期方案进行激素注射,另挑选15头青年牛等待自然发情（对照）,在发情后第7 d用B超对受体牛黄体直径（CLD）进行测量,对符合条件的受体牛进行胚胎移植。试验结果表明,CIDR+PG组发情率显著高于PG+PG组（91.11%vs 84.44%,p<0.05）;CIDR+PG组中85.37%（35/41）的发情牛集中在撤栓后的2 d内,PG+PG组中73.68%（28/38）的发情牛集中在注射第二针PG后的2-3 d。CIDR+PG组黄体合格率（70.73%,29/41）显著高于PG+PG组（65.79%,25/38）（p<0.05）。将CLD分为10 mm≤CLD≤15 mm、15 mm<CLD≤25 mm、CLD>25 mm三组,研究不同同期发情处理后第7 d的CLD与受胎率之间的关系。CIDR+PG组间受胎率无显著差异（33.33%vs 35.71%vs 33.33%,p>0.05）;PG+PG组间受胎率无显著差异（37.50%vs 36.36%vs 33.33%,p>0.05）;CIDR+PG组与PG+PG组之间受胎率也无显著差异（p>0.05）。研究结果表明,与上浮法相比,Percoll密度梯度离心法可以提高精子的利用率、受精率和胚胎卵裂率。与PG+PG法相比,CIDR+PG法处理的受体牛发情率更高、发情时间更为集中、黄体合格率更高且受体牛利用率更高。不同同期发情方法处理后受体牛的CLD与受胎率之间无显著差异。
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