猪Hes-1基因的克隆和功能分析

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由于动物体的脂肪细胞和肌肉细胞均分化自中胚层的间充质干细胞,因此成脂分化和成肌分化之间存在着广泛的联系和对话机制,其分子调控途径可能存在交联。对成脂和成肌分化协同调控机理的深入研究有助于实现对不同分化途径的定向调控,为控制机体脂肪/肌肉比例,有效改善肉质提供新的途径。近年来的研究发现,Notch信号在成脂分化和成肌分化过程中发挥着重要的调控作用,包含碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构的转录因子Hes-1是Notch信号通路的重要下游分子,其在成脂分化和成肌分化过程中的作用机制尚不明确。Fad24是一个与小鼠前脂肪细胞的增殖和早期分化密切相关的基因,表达模式和基因缺陷动物模型显示其可能与骨骼肌的形成也有关联,因此对控制机体的肌肉脂肪比例有重要意义,但其表达调控机制尚不清楚。本论文以梅山猪为研究对象,首次克隆获得了Hes-1基因全长编码区并对其序列和编码产物进行了生物信息学分析。然后构建了猪Hes-1基因真核表达载体,并与包含猪fad24基因启动子区段的荧光素酶报告基因载体共转染到猪肾细胞系IBRS-2细胞中,通过双荧光酶报告系统检测HES-1对fad24基因启动子活性的影响。本论文开展的工作为深入了解猪Hes-1基因功能和调控机制奠定了一定的基础。主要研究成果如下:1、克隆得到猪Hes-1基因包含全长编码区的cDNA (854bp),其中编码区长度为828bp,编码275个氨基酸。序列分析显示猪HES-1蛋白包含典型的bHLH结构域,且与其他哺乳动物的HES-1高度同源。2、克隆得到猪fad24基因5’上游约1.7Kb的区段,并利用双荧光素酶报告系统检测出该区段具有较强的启动子活性。生物信息学分析显示fad24基因启动子包含有可能与Hes-1互作的顺式作用元件。3、将包含猪Hes-1基因全长编码区的真核表达载体和fad24基因启动子荧光素酶报告基因载体共转染入IBRS-2细胞后,fad24基因启动子活性显著降低,表明Hes-1能够抑制fad24的转录,进而对成脂和成肌分化发挥调节作用。
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