饲料原料中的霉菌毒素检测方法比较及不同吸附剂对其吸附效果的研究

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本试验采用ELISA法对从市场上采集的47份饲料原料样品中的三种天然霉菌毒素含量(ZEN、DON、AFB1)进行检测,从中筛选出霉菌毒素含量较高的样品再用HPLC法进行准确测定,作为后续实验材料。在模拟体外条件下评估了外加吸附剂对饲料原料基质中天然毒素的吸附效果。并且通过动物试验探究DON对断奶仔猪的影响以及吸附剂对毒素损害的修复效果,进一步完善霉菌毒素吸附剂吸附效果的评价方法,验证吸附剂是否可吸附天然原料中的毒素(而非外加的纯毒素),同时提高体外评价结果对生产中使用效果的预测准确性。试验一饲料原料中霉菌毒素的检测与筛选本试验旨在利用ELISA法对市售的糟渣类、玉米副产物、饼粕类、糠麸、玉米、单细胞蛋白、小麦副产物和其他谷实类饲料原料产品进行初步筛选(每种毒素待检原料样品≥ 44份),选出三种主要霉菌毒素含量(ZEN、DON、AFB1)较高、超过国标限定标准含量的原料样品进行近一步分析测定。最后使用HPLC法对最终筛选出的样品进行毒素含量的准确测定。结果表明:除玉米(检出率为87.5%)外,糠麸、糟渣类、饼粕类等原料中ZEN的检出率均为100.00%。ZEN平均含量由高到低依次为糟渣类、玉米副产物、饼粕类、糠麸、其他谷实类原料、玉米、单细胞蛋白、小麦副产物,分别为3344.78、1075.27、305.00、197.09、177.36、80.64、47.18、23.60 μg/kg糟渣类超标率为 66.67%,其他谷实类原料、玉米、单细胞蛋白、小麦副产物四种原料中ZEN含量均未超标。44份饲料原料样品中DON含量检出率为100.00%,其中糟渣类的平均含量最高(4781.38 μg/kg),玉米副产物超标率最高为100.00%,其余原料的超标率由高到低依次为糟渣类75.00%、小麦副产物75.00%、糠麸50.00%、饼粕类16.67%。饼粕类是AFB1平均含量最高的原料(14.53 μg/kg),糟渣类和饼粕类的超标率为16.67%、30.77%,其余饲料原料的AFB1含量均未超标。试验二体外模拟环境下的霉菌毒素吸附剂吸附效果评价本试验旨在通过模拟胃肠道环境评价吸附剂对试验一筛选出的饲料原料中天然毒素的吸附效果。此外检测模拟肠液环境中吸附剂对纯ZEN的吸附效果,对比两种评价方法的差异。结果表明:本实验室试制吸附剂2-B-2对于两种原料中天然ZEN的吸附效果显著高于膨润土和商用吸附剂P。2-B-2对于玉米蛋白粉中天然ZEN的吸附率为55.27±2.94%,对DDGS中ZEN的吸附率为59.04±7.60%。P对于玉米蛋白粉中ZEN的吸附率仅为16.92±8.49%,2-B-1对于DDGS中天然ZEN的吸附效率(62.35±2.11%)最好,本实验室试制吸附剂1-B-0.5对DDGS中ZEN的吸附效率最差。吸附剂2-B-2、P和膨润土对于DDGS中天然DON的吸附效果优于对大麦中天然DON的吸附效果,2-B-2对于两种天然毒素的吸附效果最好。本实验室试制吸附剂2-C-1对于DDGS中DON吸附效果(38.45±1.61%)显著低于其他6种吸附剂。全部7种吸附剂在模拟肠液环境中对纯毒素的吸附率偏低,其中2-B-2与本实验室试制吸附剂2-A-0.5的吸附率分别下降83.96%和70.14%(P<0.05)。试验三呕吐毒素对仔猪采食量和肠道健康的影响及吸附剂的修复效果评价基于前文模拟胃肠道环境下吸附剂对原料中天然DON的吸附率结果,本试验旨在验证饲料中DON含量对断奶仔猪采食量和肠道上皮形态的影响,以及研究吸附剂在体内对DON损害的修复效果。试验分为两部分,第一部分试验选用5周龄断奶仔猪(长×大)96只,公母各半,随机分成4组(每组3个重复,每个重复8头猪)。饲喂以天然DON含量高的霉变大麦和DDGS为原料配置的4种营养水平相近的饲粮,DON含量分别为<500μg/kg(对照组)、1000μg/kg、2000μg/kg和3000 μtg/kg,评价DON对仔猪生长性能和肠道健康影响。第二部分试验选取5周龄断奶仔猪(长×大)144只,公母各半,随机分6组(每组3个重复,每个重复8头猪)。试验饲粮来源同上,配制DON含量分别为<500和3000μg/kg的2种营养水平相近的基础日粮,每种饲粮分别添加A或B两种吸附剂0.0或1.0 kg/T,共6种试验日粮。结果表明:在平均采食量等生产性能指标方面,与对照组相比,1000 μg/kg组、2000μg/kg组和3000 μg/kg组的平均采食量分别下降4.86%、13.13%和27.96%(P>0.05);3000 μg/kg 组平均采食量下降 31.93%(P<0.05),3000 μg/kg 组+A 吸附剂下降 24.15%(P>0.05),3000 μg/kg 组+B 吸附剂下降 30.75%(P<0.05)。上述各组之间的体重指标无明显差异。由肠道切片HE染色图可发现摄入DON污染的饲粮可导致仔猪小肠上皮绒毛萎缩及受损破裂。因此,DON污染的饲粮降低了断奶仔猪的生长性能,添加DON吸附剂能够改善DON对断奶仔猪生长性能的不利影响,并缓解DON对断奶仔猪所产生的肠道损伤。
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