目的:探讨三维共培养模型(three-dimensionalco-culturemodel,3D共培养模型)对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbalstemcells,LSCs)的作用。方法:体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(humanperiodontalligamentstemcell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分组,纤维蛋白胶组将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组阳性率。结果:共培养5d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组、羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.00)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔角膜缘干细胞。