【摘 要】
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目的:星形胶质细胞(Astrocyte AS)在中枢神经系统中含量多、分布广,其在神经系统发育、突触传递、神经系统内环境的稳定及新陈代谢等多种正常生理活动中,以及神经系统疾病的
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目的:星形胶质细胞(Astrocyte AS)在中枢神经系统中含量多、分布广,其在神经系统发育、突触传递、神经系统内环境的稳定及新陈代谢等多种正常生理活动中,以及神经系统疾病的病理机制中都起着十分重要的作用。例如星形胶质细胞参与中枢神经系统损伤后产生的反应性星形细胞胶质化(Reactive astrogliosis),并且作用复杂。如脊髓损伤后AS的反应性胶质化具有两重性。反应性星形胶质化的标志是星形胶质细胞数增加,胞体肥大,分支增多,胶质纤维酸性蛋白的表达增强。胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acdic protein GFAP)是一种分子量为50-52KDa的酸性蛋白,属细胞骨架蛋白,是星形胶质细胞的标志蛋白。并且, GFAP随着星形胶质细胞胶质化反应程度不同而表达程度不同,因此GFAP同时可以用于标记损伤后的胶质活动。本实验旨在经体外分离、培养来纯化获得的星形胶质细胞,并导入以胶质纤维酸性蛋白基因的不同位点为靶标的3条siRNA诱导胶质纤维酸性蛋白mRNA基因沉默,通过观察细胞形态变化及检测细胞GFAP表达改变,来分析应用siRNA技术抑制靶基因后对相关蛋白表达的影响,以期为抑制脊髓损伤后星形胶质细胞过度活化,并为进一步研究解决SCI后瘢痕过度增生、清除脊髓轴突再生障碍,从而促进神经轴突损伤修复奠定实验基础。方法:分离1周内新生SD大鼠大脑皮层细胞,用含20%血清的DMEM/F12的培养基培养,经原代及传代培养,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。待传代培养生长态势良好时,随机将其
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