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背景骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是儿童和青少年中最常见的原发性恶性骨肿瘤,常发生于长骨干骺端,其特点是复发率高,预后差。尽管辅助化疗和晚期手术相结合,患者的5年累积生存率仍然不太乐观。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一小类内源性非编码RNA,其长度范围从18到25个核苷酸。研究表明mi RNA影响肿瘤微环境并与恶性肿瘤发生发展有着密不可分的关系。目的1.检测mi R-885-5p在骨肉瘤细胞和组织中的表达水平。2.探讨mi R-885-5p在骨肉瘤组织中表达与临床病理参数之间的关系。3.观察mi R-885-5p对骨肉瘤细胞的生物学行为的影响。4.探寻mi R-885-5p的靶基因,阐明其对靶基因的调节机制。方法1.利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)技术检测MG63,U2OS人骨肉瘤细胞系和h FOB1.19人正常成骨细胞株中mi R-885-5p表达水平。2.收集福建医科大学附属第一医院2015年9月至2017年8月通过手术切除的骨肉瘤组织以及相应的癌旁组织临床样本共31例。利用RT-q PCR技术检测比较mi R-885-5p在骨肉瘤和癌旁组织的表达差异。3.通过患者病例资料分析,揭示mi R-885-5p与骨肉瘤病理参数之间的关系。所收集病例相应病理参数包括:性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤定位、肿瘤分期和转移。4.人工合成重组慢病毒mi R-885-5p mimic,mi R-885-5p inhibitor and mi R-885-5p negative control转染MG63细胞并构建mi R-885-5p-up/down稳转株。细胞实验分组:(1)Blank组:未经任何处理MG63细胞;(2)NC组:转染mi R-885-5p negative control;(3):mi R-885-5p-up组:转染mi R-885-5p mimic;(4)mi R-885-5p-down组:转染mi R-885-5p inhibitor。5.采用MTT实验和克隆形成实验观察mi R-885-5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。6.利用Transwell方法观察mi R-885-5p对骨肉瘤细胞迁移能力的影响。7.通过Target Scan,mi Randa和mi RBase Targets数据库的生物信息分析对mi R-885-5p的靶基因进行预测。根据信息分析预测结果,构建CDC73的野生型和突变型荧光素酶报告载体,与mi R-885-5p mimic和mi R-885-5p negative control共转染MG63细胞。应用双荧光素酶报告技术验证CDC73是否为mi R-885-5p的靶基因。8.利用Western Blot实验检测骨肉瘤细胞中的CDC73的表达情况。结果1.骨肉瘤细胞系MG63,U2OS mi R-885-5p表达水平比人正常成骨细胞株h FOB1.19明显升高。2.在31对临床组织样本中,骨肉瘤mi R-885-5p表达水平比癌旁组织明显升高。3.mi R-885-5p高表达与骨肉瘤的进展相关,包括肿瘤大小和外科分级。4.慢病毒转染后,与Blank组和NC组相比,mi R-885-5p-up组细胞表达水平明显升高且mi R-885-5p-down组细胞水平明显下降。5.在MTT细胞增殖实验中,与Blank组和NC组相比,mi R-885-5p-up组细胞OD570吸光光度值明显增大且增殖比例逐步上升,而mi R-885-5p-down组表现相反的趋势。6.Transwell迁移实验结果表明,与Blank组和NC组相比,mi R-885-5p-up组迁移细胞数明显增多,而mi R-885-5p-down组迁移细胞数明显减少。7.双荧光素酶实验结果证实,CDC73是mi R-885-5p的一个靶基因。8.Western Blot实验结果表明,与Blank组和NC组相比,mi R-885-5p-up组细胞CDC73表达水平明显下降,而mi R-885-5p-down组细胞CDC73表达水平明显升高。结论1.mi R-885-5p在骨肉瘤中表达水平明显升高,且高表达的mi R-885-5p与骨肉瘤的进展相关。2.mi R-885-5p促进骨肉瘤细胞的增殖和迁移。3.mi R-885-5p通过负向调控CDC73表达发挥其生物学的功能。