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该文根据SSB蛋白的物理化学性质,采用兔胸腺丙酮粉为原料,采用三步生化提纯程序(硫酸铵盐析、DEAE Sephadex A-50阳离子交换层析和Heparin Sepharose 4B亲和层析)进行了分离纯化工艺的确立.通过这三步层析,可把细胞中大量杂蛋白除云,从而获得高纯度(98﹪),高收率(>2.0﹪)的抗原性SSB蛋白.在DEAE Sephadex A-50阴离子交换层析中,对离子交换剂的吸附容量及洗脱分离条件分别进行了优化试验,结果表明:进样蛋白质浓度为2mg/mL,进样体积为38mL,进样流速控制在0.5mL/min,样品处理液为5mmol/L PB(pH6.5);用洗脱液为含0.1mol/L和0.4mol/L NaCl的5mmol/L PB(pH6.0),进行二阶段梯度洗脱,洗脱流速为1mL/min时对SSB蛋白的单步收率最高(87.8﹪).利用SSB蛋白与Heparin生物亲和的特性,进行比阴离子交换更为精细的纯化.从中搜索出了能获得高收率SSB蛋白且具有较强抗SSB抗体活性、纯度更高的纯化工艺.Heparin亲和层析实验结果:样品稀释缓冲液为20mmol/L Tris-HCl(pH8.0);洗脱缓冲液为20mmol/L Tris-HCl,pH7.0(含0.55mol/LNaCl);进样浓度:<5mg/mL;进样流速:0.5-1mL/min;洗脱流速:1-2mL/min;收集规格:1~1.5mL/min.由此操作条件可获得抗SSB抗体特异性较高,纯度达98﹪,且单步收率为60.45﹪,总收率为2.55/100.经免疫学鉴定,完全适合临床上检测的要求.对纯化后SSB蛋白的理化性质经间接ELISA检测表明,该实验室自制的SSB蛋白在下列最佳操作条件下,仍然保持了与病人血清中抗SSB抗体有着较强反应活性:-20℃保存3个月,在此低温下可反复冻融5次;4℃条件下可保存2个月;在37℃条件下可保持20h;在56℃加热1h后,则SSB蛋白完全失活.在pH6-7之间SSB蛋白生物活性较高.SSB蛋白对胰蛋白酶特别敏感.为了将自制SSB蛋白应用于临床检测,该文在实验室建立了检测抗SSB抗体血清的间接ELISA方法.经方阵实验表明,自制SSB蛋白包被浓度适宜量为5μg/mL;阳性血清稀释度为1:100;酶标抗体稀释度为1:4000.封闭液采用5﹪新鲜小牛血清与5﹪BSA混合物;实验室临界值(CUT-OFF)为0.421.将自制SSB蛋白与商用SSB蛋白包被酶标板的ELISA检测以及间接ELISA法检测和敏感性及特异性比商用SSB蛋白包被的ELISA法检测和WBT法检测强,适合临床诊断应用.