【摘 要】
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本研究以海生红藻多管藻(Polysiphoniaurceolata)为材料,以50mmol/L磷酸缓冲液(PBS)浸泡使藻体破碎;超滤后采用多维柱层析方式依次经过SephadexG-150凝胶过滤和DEAE-Sepharos
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本研究以海生红藻多管藻(Polysiphoniaurceolata)为材料,以50mmol/L磷酸缓冲液(PBS)浸泡使藻体破碎;超滤后采用多维柱层析方式依次经过SephadexG-150凝胶过滤和DEAE-SepharoseFF离子交换层析,分离纯化得到纯度A618/A280﹥4.0的R-藻蓝蛋白(R-PC);实验采用非变性等电聚焦(Native-PAGE)测得R-PC等电点为5.6,变性等电聚焦测得α亚基等电点为6.5,两个β亚基等电点分别为5.5(β5.5)和5.6(β5.6);SDS-PAGE测得α亚基分子质量为18.2kDa,两个β亚基的分子质量分别为20.0kDa(β20.0)和20.9kDa(β20.9);二维电泳验证等电聚焦中的两个β亚基在二维电泳中均表现为两个分子质量20.0kDa和20.9kDa的单一条带;将二维电泳后的四个亚基条带经基质辅助激光解吸离子化质谱(MALDI-MS)检测搜库,得到多管藻R-PCβ亚基与红藻紫菜属中的紫红紫菜C-PCβ亚基序列相似度最高且具备不同的序列覆盖率;一级谱图得到四个β亚基的差异肽段,二级谱图得到差异片段的氨基酸序列。因此,实验结果表明多管藻R-PC含有五个亚基,分别为α、β20.95.5、β20.05.5、β20.95.6和β20.05.6。
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