论文部分内容阅读
目的：人们对一氧化氮（NO）的研究热情已经持续了10年，其中关于NO在糖尿病肾病（DN）中的作用研究报道也在不断涌现，但是NO在DN中的作用还远未被阐明。已有研究表明，NO在DN中具有重要作用。对于DN防治的几大备选靶点，包括转化生长因子β（TGF-β）、细胞外基质沉积、活性氧中间产物（ROI）和蛋白激酶C（PKC）等，均有研究显示NO可发挥有利于DN防治的作用。目前)NO在DN中的作用研究中面临的主要问题是NO作用的两面性如何克服和NO在DN发展各阶段中的确切作用不清。为了有助于弥补人们当前对NO与DN认识的不足，本课题拟从体外、体内实验和群体遗传学三个角度对NO在DN中的作用机理进行深入研究。方法：（1）体外实验部分就NO对高糖环境中培养的肾小球系膜细胞（GMC）的影响进行研究，主要观察指标包括GHC增殖、凋亡、iNOS mRNA表达、TGF-β1 mRNA表达及分泌等。此外，该部分研究中还对AS-ODN iNOS基因封闭技术对系膜细胞的影响及其研究价值进行了探讨；（2）体内实验研究部分就NO对糖尿病大鼠早期肾脏改变的影响进行研究，观察指标包括糖尿病早期NO、ROI代谢改变，血清TGF-β1、C—反应蛋白（CRP）改变，肾脏iNOS、ecNOS和TGF—β1的免疫组化研究，结合NO对糖尿病早期代谢紊乱、肾脏功能和形态学改变的影响，对NO在DN中的体内作用机理进行探讨；（3）群体遗传学研究部分对天津地区汉族人ecNOS4a/b多态性与DN的关联性进行研究，力求从遗传学角度探讨NO在DN中的发病机理。此外，在群体遗传学研究部分我们还将长期研究工作中总结出来的一套较完善的Meta-分析方法进行了汇报。结果：（1）GMC培养研究结果显示对于高糖造成的不利影响，单纯促进或抑制NO合成均不足以对抗高糖对GMC的各种影响，而NO和ROI清除剂则可以拮抗高糖对GMC影响，该发现对于解释NO作用的两面性具有重要学术价值，即NO体外实验中发现的两面性作用主要来自于NO与GMC糖代谢之间的相互作用和ROI的影响。AS-ODN iNOS基因封闭研究结果证实 天津医科大学博士研究生学位论文 AS－ODN技术是实现iNOS特异性调控的有效方式，并且直接证实了抑制GMC 诱导性NO产生可以促进TGF－6；表达。（2）动物实验研究结果表明NO过度 合成（尤其是 ecNOS NO过度合成）是糖尿病早期肾脏改变的重要原因，抑制 NO合成可以纠正糖尿病早期的肾脏各种功能和形态改变，该作用不依赖于NO 对糖尿病代谢紊乱的影响，此外还证实了血清TGF寸；和CRP是DN的两种理 想血清标志物。但是，实验结果提示NO调控对DN防治的远期效果还需要进 一步研究。仰 群体遗传学结果表明，天津地区汉族人eCNOS4a／b多态性与 D＼无关联性，但与非DN导致的CRF有关联性，a等位基因与CRF危险性增加 有关。ec＼Os在m导致的CRF中的作用与在其它原发病导致的CRF中的作用 不同，该结果还可进一步支持 NO合成增加（而不是降低）是糖尿病的危险因 素。此外，该部分研究还发现天津地区汉族正常人群a基因频率低于日本人 和澳洲白种人。其后的Meta一分析结果显示了另一种DNA多态现象ACE／ID 与中国人m有关联性，但也提示ACE／ID在中国人n中的作用被给予了过高 估计。结论：本研究从三个角度证实了m在m中具有重要作用：皿过度合 成是糖尿病早期肾脏改变（由此可能是m）的主要原因：结合体内、外实验 结果带来的启示，以＼0为靶点防治D卜不能忽视RO工的作用。