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目的:1.研究伴或不伴有髓外病变(EMD)的多发性骨髓瘤(MM)患者BM-MSCs源性外泌体在骨髓瘤细胞获得EMT样特征中的作用。2.研究伴或不伴有EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体在骨髓瘤细胞获得干性中的作用。3.研究伴或不伴有EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体在骨髓瘤细胞侵袭性中的作用。方法:1.采用Ficoll密度梯度离心法,分离培养MM患者的BM-MSCs;磁珠分选MM患者原代骨髓瘤细胞。2.采用超速离心法提取骨髓瘤患者的BM-MSCs源性外泌体。3.应用透射电子显微镜及Western blot检测鉴定BM-MSCs源性外泌体。4.将PKH67荧光标记的外泌体与骨髓瘤细胞共培养,共聚焦显微镜下观察骨髓瘤细胞对BM-MSCs源性外泌体的摄取情况并拍照。5.实时定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266,与伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组EMT(Vimentin、Twist)、干性(NANOG、OCT4)相关标志物m RNA的表达情况。6.Western blot检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞,与伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组及LP-1、U266或原代骨髓瘤细胞单培养组MM细胞的EMT相关标志物(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、β-Catenin)蛋白的表达情况。7.应用Transwell法检测多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞,与伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组及LP-1、U266或原代骨髓瘤细胞单培养组MM细胞的侵袭性有无差别。8.应用mi RNAs测序分析伴或不伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体mi RNAs表达差异,实时定量PCR进行验证。结果:1.BM-MSCs源性外泌体在透射电镜下显示直径在100nm左右,具有明显的膜,立体结构清晰,形状呈茶托样或凹半球样。Western blot检测其表达CD81,不表达Cytochrome C。2.多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞对多发性骨髓瘤患者BM-MSCs源性外泌体有明显的摄取。3.与不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组相比,多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266和伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组的骨髓瘤细胞EMT(Vimentin、Twist)相关标志物及干性(NANOG、OCT4)相关标志物的m RNA表达上调。4.与不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、骨髓瘤细胞单培养组相比,多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞和伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组的骨髓瘤细胞EMT相关标志物(N-Cadherin、Vimentin、β-Catenin)的蛋白表达上调,E-Cadherin蛋白表达下调。5.与不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组、骨髓瘤细胞单培养组相比,多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞和伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养组的骨髓瘤细胞的侵袭能力增强。6.外泌体mi RNAs测序结果显示,伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体明显高表达mi RNA199a、mi RNA197、mi R-17-5p、mi R-18a-3p、mi R-19a-3p等一些促癌性mi RNAs;应用实时定量PCR进行验证,发现伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体明显高表达mi R-199a、mi R-197。结论:多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞和伴或不伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体共培养,可以观察到多发性骨髓瘤细胞株LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞对多发性骨髓瘤患者BM-MSCs源性外泌体有明显的摄取;伴EMD的MM患者的BM-MSCs源性外泌体使LP-1、U266的EMT(Vimentin、Twist)相关标志物及干性(NANOG、OCT4)相关标志物的m RNA表达上调;使LP-1、U266及原代骨髓瘤细胞的EMT相关标志物(N-Cadherin、Vimentin、β-Catenin)的蛋白表达上调,E-Cadherin蛋白表达下调及侵袭能力增强。因此本研究表明,伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体能被骨髓瘤细胞摄取并调节骨髓瘤细胞的功能,使多发性骨髓瘤细胞获得EMT样特征、干性及侵袭能力增强。同时我们应用实时定量PCR验证了,与不伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体比较,伴EMD的MM患者BM-MSCs源性外泌体明显高表达mi R-199a、mi R-197。我们首次研究了伴及不伴EMD的骨髓瘤患者的BM-MSCs源性外泌体在多发性骨髓瘤获得EMT样特征、干性及侵袭性中的作用,期望进一步阐明骨髓瘤EMD的发生机制,并为治疗伴EMD的骨髓瘤患者提供新靶点。