人源诺如病毒（Human noroviruses,HuNoVs）是全球范围内引起非细菌性肠胃炎的主要食源性病原体。VP1是该病毒的主要衣壳蛋白,由S（Shell domain）和P（Protruding domain）结构域构成,P结构域被认为是病毒与其受/配体结合的主要功能域。根据VP1基因特征可将HuNoVs分成不同基因型,其中,GⅡ.4型是全球主要流行毒株。由于该病毒暂无成熟的体外培养模式和小动物模型,传统的病毒-受/配体研究方法不具有可操作性。牡蛎作为滤食性动物是HuNoVs的主要传播载体之一。最新研究表明牡蛎热休克蛋白70（Oyster heat shock protein 70,oHSP70）是牡蛎组织靶向富集HuNoVs的重要配体,但结合的分子机制尚不清楚。解析HuNoVs与oHSP70互作的分子机制成为牡蛎中HuNoVs防控的重要突破口。本课题首先在实验室前期研究的基础上,以不同基因型HuNoVs的VP1序列为模板,从NCBI数据库中下载43条代表性VP1序列进行生物信息学分析,利用DNAMAN软件对VP1 P蛋白275-420位氨基酸序列进行分组比对,预测了14个HuNoVs与受/配体结合的潜在保守位点。利用PCR定点突变技术对预测位点逐一进行定点突变,构建重组突变质粒并通过细菌细胞表面展示技术建立HuNoVs（GⅡ.4）P蛋白突变体库。其次,分别纯化各HuNoVs（GⅡ.4）P突变蛋白,以鼠抗oHSP70为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,通过ELISA鉴定出HuNoVs（GⅡ.4）P蛋白中11个与oHSP70结合相关的氨基酸位点。其中,两个结合必须的关键氨基酸（P318和D325）突变后结合能力分别降至0%和11%;另外9个与结合相关的氨基酸位点（G322,P324,P360,G363,P406,Y408,L418,A419,P420）突变后结合能力均低于50%。最后,根据实验结果,通过SWISS-MODEL和PyMOL软件对oHSP70结合相关氨基酸位点在HuNoVs（GⅡ.4）P蛋白空间结构上的位置进行分析。发现两个关键氨基酸分别暴露在P蛋白表面的两个深“口袋”中,并且紧挨由五个氨基酸（P406,Y408,L418,A419,P420）形成的一个暴露表面。因此我们推测,这7个氨基酸构成了HuNoVs（GⅡ.4）P蛋白与oHSP70的结合界面,并直接参与了VP1与oHSP70的互作。P324,P360,G322和G363虽未直接参与VP1和oHSP70的结合,但推测是维持互作界面完整性和稳定性的氨基酸,其突变间接影响了VP1和oHSP70的结合。本课题通过研究HuNoVs衣壳蛋白P结构域与oHSP70的互作,初步揭示了HuNoVs与oHSP70结合的关键氨基酸位点,丰富了HuNoVs与受/配体结合机制的探究。可为阻断HuNoVs在牡蛎中富集与传播策略的制定提供理论基础。