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目的:研究RIPK4(Receptor-interacting-protein kinase 4)基因在骨肉瘤组织及细胞中的表达;通过小干扰RNA沉默骨肉瘤MG-63细胞中RIPK4基因的表达,观察抑制RIPK4基因后对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法:使用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR法分别检测骨肉瘤患者原发灶中RIPK4蛋白的表达情况及骨肉瘤细胞中RIPK4mRNA的表达情况;设计具有沉默效应作用的RIPK4siRNA,将其通过载体脂质体转染入骨肉瘤细胞,使MG-63细胞中RIPK4基因的表达水平下调,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖水平;流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别从mRNA及蛋白的表达水平检测MG-63骨肉瘤细胞中β连环蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白(CyclinD1),细胞凋亡及自噬相关因子Bcl-2、LC3及Beclin1的表达。结果:①免疫组织化学方法检测显示骨肉瘤患者标本中RIPK4蛋白表达阳性,实时荧光定量PCR法结果显示RIPK4mRNA在骨肉瘤细胞中的表达明显高于正常成骨细胞(P<0.05);干扰后,RIPK4siRNA转染组骨肉瘤MG-63细胞中RIPK4mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(control siRNA组)及空白对照组(未加任何试剂的MG-63细胞)(p<0.05);CCK-8检测骨肉瘤MG-63细胞RIPK4siRNA转染组较阴性对照组及空白对照组增殖能力明显受到抑制(p<0.05);RIPK4siRNA转染组骨肉瘤MG-63细胞中β-catenin mRNA及CyclinD1 mRNA及其蛋白的表达水平下调(p<0.05);流式细胞仪检测骨肉瘤细胞转染组较control siRNA组及空白对照组细胞凋亡率明显增加(p<0.05);RIPK4siRNA转染组骨肉瘤MG-63细胞中Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量下降(p<0.05),Beclin1及LC3 mRNA及其蛋白的表达水平上升(p<0.05)。结论:①RIPK4蛋白及其mRNA在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中异常表达,RIPK4基因可能参与骨肉瘤的发生发展过程。②沉默RIPK4基因的表达可以抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,这一作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。③沉默RIPK4基因可以促进骨肉瘤MG-63细胞的凋亡和自噬,且两者之间可能存在一定的联系。