[目的]通过大鼠前房穿刺灌注,建立不同时间点的视网膜缺血-再灌注模型,观察大鼠视网膜损伤后视网膜小胶质细胞的激活状态及不同时间点IL-1β,TNF-a,iNOs等炎性因子的分泌变化,分析小胶质细胞激活与神经细胞死亡的相互关系,并探讨活化小胶质细胞在损伤后释放炎性细胞因子的作用机制,旨在根据研究结论对于视网膜缺血性疾病的治疗带来一定的指导意义。[方法]将双眼成年的SPF级别的雄性SD大鼠,共105只,共105只眼,将其随机分为5组,分别为:正常组,假手术组,损伤后24h组,3d组,7d组,在相同实验条件下,建立视网膜缺血-再灌注模型,利用30-gauge针头进行前房穿刺,针头连接0.9%生理盐水,将瓶高升高至150cm,维持灌注60min后,拔除前房穿刺针头。在模型建立后24h, 3d及7d后取材,进行石蜡包埋切片,视网膜切片通过HE染色和凋亡实验,观察缺血损伤不同时间点,视网膜神经节细胞层的厚度改变及神经节细胞的凋亡情况。通过进行视网膜冰冻切片后,免疫荧光染色,特异性观察小胶质细胞的激活情况及缺血损伤后不同时间点小胶质细胞的激活比例。利用RT-PCR检测损伤后不同时间点的IL-1 β,TNF-a,iNOs等炎性因子的分泌情况与视网膜神经节细胞损伤的对应关系。通过以上步骤,分析视网膜缺血损伤不同时间节点,视网膜结构改变与小胶质细胞激活比例、激活后分泌的炎性因子的对应关系。[结果]对进行HE染色的视网膜石蜡切片观察,可发现:正常组与假手术组大鼠视网膜各层次结构清楚,各层细胞排列整齐,厚度均匀,神经节细胞层各细胞边缘清楚,缺血-再灌注损伤后24h,大鼠神经节细胞出现空泡变性,神经节细胞数量变少。缺血-再灌注损伤3d后,相较于对照组的大鼠视网膜神经节细胞层厚度,视网膜神经节细胞层变薄,神经节细胞数量减少,视网膜厚度变薄,缺血损伤后,神经节细胞层细胞排列紊乱,部分神经节细胞细胞可见明显空泡变性,胞浆内空泡形成,部分细胞核溶解,残存的神经节细胞细胞核染色深,视网膜内网层明显变薄。缺血-再灌注损伤7d后,视网膜神经节细胞层厚度较3d组的神经节细胞层厚度明显变薄,神经节细胞数量明显减少,大量细胞空泡变性,另外缺血-再灌注损伤大鼠视网膜内网层明显变薄,内核层细胞水肿明显,体积增大,染色变浅。视网膜凋亡实验结果显示正常组与假手术组仅表现背景荧光,无阳性细胞表达,而在缺血-再灌注损伤后24h,除红色背景荧光外,可见少量阳性细胞(P=0.263>0.05,无明显统计学意义),阳性反应细胞逐渐增多,主要集中在视网膜内层,缺血-视网膜损伤3d后,可见阳性表达细胞最多(P=0. 000<0. 05,差异存在统计学意义),缺血损伤7d后,可也见大量凋亡细胞,但凋亡细胞数量较3d组的减少(P=0.002<0.05,差异存在统计学意义)视网膜Iba-1标记小胶质细胞,在正常组及假手术组中仅可在视网膜神经节细胞层看到静息状态的小胶质细胞,可见小胶质细胞胞体呈树枝状突起。缺血-再灌注损伤后24h,可见相比较于正常组及假手术组,小胶质细胞的数量明显增多,视网膜神经节层和外丛状层静息状态下的小胶质细胞大量激活,其中以视网膜神经节层为主,树枝状突起回缩,胞体变圆,内丛状层仍可见许多仍处于静息状态的小胶质细胞。在缺血-再灌注损伤3d后,可见视网膜神经节细胞层、内丛状层、外核层大量小胶质细胞激活。缺血损伤7d后,激活的小胶质细胞数量下降,但神经节细胞层及外核层仍可见大量激活的小胶质细胞。正常视网膜内IL-Iβ、TNF-α、iNOs的表达量较低,且与假手术组炎性因子的表达无明显统计学差异,缺血-再灌注损伤后24h,IL-1β、TNF-α、iNOs的mRNA表达量都大幅度增加(与正常对照组相比,P=0. 000<0. 05,有统计学差异),并且随损伤时间的增加而增加,损伤后3d达到峰值后(与正常对照组相比,P=0. 000<0. 05,有统计学差异),炎性因子的表达逐渐下降,损伤后7d,仍可见大量炎性因子表达。(与正常对照组相比,P=0. 000<0. 05,有统计学差异)[结论]视网膜缺血-再灌注损伤后,随着损伤时间的延长,视网膜神经节细胞层厚度、内丛状层厚素及整体视网膜厚度越来越薄。同时,视网膜缺血可刺激视网膜小胶质细胞的增殖及迁移,视网膜中炎性因子IL-1β、TNF-α、iNOs的表达增加,且与视网膜神经节细胞凋亡程度、小胶质细胞活化程度相对应,因此,可认为,视网膜缺血-再灌注损伤后,小胶质细胞激活,且激活的小胶质细胞分泌炎性因子IL-1β、TNF-α、iNOs,炎性因子引起视网膜的炎症反应及相应结构的病理学改变。