血必净注射液(简称“血必净”)是由红花、赤芍、川芎、当归和丹参五味中药制备而成的中药制剂,是目前唯一被国家药品监督管理局批准用于治疗脓毒症的中药注射剂,血必净临床疗效的可重复取决于血必净的质量一致性,本研究旨在建立血必净的新型质控分析方法,并用于评价其多批次质量一致性。目的建立与治疗脓毒症疗效相关联的血必净新型质控分析方法,并用于血必净的质量一致性评价。方法本实验建立血必净的新型质控分析方法,第一步为选择与血必净抗脓毒症疗效关联的标志性成分;首先,在基于对血必净全成分谱的研究基础上,进一步基于药代动力学研究信息及药效活性信息,选择与血必净治疗脓毒疗效相关联的活性成分,且同时考虑五味组成中药以反映血必净的方剂整体性;第二步基于选择的目标检测成分,建立LC/MS-MS和LC/UV单点校正分析方法,并基于单点校正法进行实验条件优化及方法学验证,具体通过优化色谱条件,使得标志性成分不受非目标成分及血必净基质的干扰,并通过LC/MS技术相互验证、设计“线性研究”实验以满足单点校正法的三个前提条件以保证分析方法测定可靠性,并对所建分析方法作方法学验证;最后,将建立的LC/MS-MS和LC/UV两种分析方法用于连续3年的33个批次血必净注射液的质量一致性评价,并基于两种分析方法测定结果进行线性相关数据处理进一步证明分析方法的可靠性。结果本研究基于对血必净成分谱的全面认识,以及系统的药代动力学信息和药效学信息,最终选出羟基红花黄色素A、芍药苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、洋川芎内酯I、洋川芎内酯G、阿魏酸、丹参素、原儿茶醛9个与血必净疗效相关联的主要成分,作为目标检测成分建立LC/MS-MS和LC/UV两种质控分析方法。基于单点校正法的三个前提条件,即标准溶液中与未知样品中化合物检测响应接近、检测浓度处于浓度-响应呈线性的浓度线性范围内、“零截距”,对分析方法进行优化,建立了满足上述条件的单点校正法并进行方法学验证,结果表明本研究所建的基于单点校正法的LC/MS-MS和LC-UV分析方法可靠。基于可靠的分析方法,进一步用于连续3年的33个批次的血必净质量一致性分析,结果显示,33个批次血必净中,所选成分的批间波动均<15%(4.1%–14.7%),除洋川芎内酯I为26.5%,表明血必净连续三年的3个血必净批次批间波动较小;LC/MS-MS和LC-UV两种分析方法测定33个批次血必净中9个目标成分的含量(n=297)的线性关联结果显示,LC/MS-MS法测定结果与LC-UV法测定结果非常接近,线性相关系数为0.9995,斜率为1.009,进一步验证了两种分析方法的可靠性。结论本研究成功建立了基于单点校正法定量的血必净的新型质控分析方法,该分析方法与血必净的疗效相关联,反映了血必净的方剂整体性,且该分析方法在应用时具有省时、省力、低成本、可靠耐用的特点;用已建立的新型质控分析方法评价血必净质量一致性,结果表明连续三年的33个批次的血必净批间波动小,具有良好的质量一致性。