天山雪莲是一种濒临灭绝的名贵中药,资源极为稀缺。运用细胞体外培养技术可以在短期内获到大量的雪莲细胞培养物,理论上可生成与植物雪莲相同的药效物质,从而成为天然雪莲的替代资源。本文旨在明确天山雪莲细胞培养物中化学成分,为这种新资源的质量控制及进一步开发奠定基础。此外,本文还开发了新制备型循环液相色谱系统(下文称“自制色谱系统”),用于解决雪莲细胞培养物中低含量成分难分离的问题。本文第一部分(第一章)综述了药用雪莲植物以及天山雪莲细胞培养物中化学成分的研究进展,这其中包括简单苯丙素类、香豆素类、木脂素类、生物碱类、萜类、黄酮类、甾体类等多种化合物,为天山雪莲细胞培养物化学成分的系统研究提供参考。同时,综述了色谱仪器的在线前样品处理技术和循环色谱仪器的研究进展,为新色谱系统的开发奠定基础。本文第二部分(第二章)对天山雪莲细胞培养物的化学成分进行了系统的研究,分离鉴定了酚酸、黄酮、木脂素等类型化合物共计41个,研究结果表明咖啡酰奎尼酸类化合物是该细胞培养物中最为丰富的物质。其中,苹果酰-咖啡酰-奎尼酸类化合物为新物质,目前在天然植物尚属罕见,因此在分子结构上具有特征性。体外自由基清除实验结果表明,这些新物质具有高抗氧化活性。基于以上研究,本文针对雪莲细胞培养物中5个代表性物质(即绿原酸、紫丁香苷、1,5-O-二咖啡酰奎尼酸,两种苹果酰-咖啡酰-奎尼酸类新化合物),建立了定量分析方法,为该细胞培养物的质量控制,以及培养工艺的调控提供了参考。本文第三部分(第三～四章)设计了新制备型循环液相色谱系统用于雪莲细胞培养物中低含量成分的分离。与传统仪器相比,该色谱系统的主要特点是添加了捕集柱系统,具有在线样品富集、色谱峰捕集、低含量成分富集、循环分离、产品浓缩回收等多种实用性功能,可以以简捷高效的循环分离方法从复杂样品中制备出低含量化合物。本文应用自制色谱系统,建立了雪莲细胞培养物中3个苹果酰-咖啡酰-奎尼酸类新物质的循环分离方法,并以多酚类化合物为模型样品研究了该循环分离方法适用的物质极性范围,实验结果表明中等极性和较弱极性(极性与绿原酸接近或较弱)的化合物适用于该方法分离。作为扩展研究,本文应用该色谱系统从药物水飞蓟素中分离出一种含量在百分之一以下,且化学性质不稳定的微量杂质。以上实例证明了自制色谱系统具有很好的实用性,尤其对天然产物或药物分离领域中的低含量化合物具有很好的分离效果。