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第一部分活血化痰方对Apo E-/-小鼠抗动脉粥样硬化斑块形成及脂质代谢的作用目的:通过建立动脉粥样硬化（AS）小鼠模型,模拟动脉粥样硬化斑块形成机制,观察活血化痰方对Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。通过检测小鼠血清血脂水平及肝脏脂质沉积水平,初步探讨活血化痰方是否通过调节小鼠脂质代谢发挥抗动脉粥样硬化斑块形成的作用。方法:24只Apo E-/-小鼠随机分为空白组、模型组、西药组、活血化痰方组,每组各6只。空白组小鼠喂予普通小鼠饲料,其余各组的小鼠喂予高脂饲料。空白组和模型组每天给予等量蒸馏水灌胃,西药组的小鼠每天给予可定进行灌胃给药,活血化痰方组小鼠每天给予中药水煎剂进行灌胃给药。12周后,观测各组小鼠体质量,HE染色观察小鼠主动脉窦处病理结构的变化,油红O染色观察主动脉窦处的脂质沉积面积的变化,Masson染色观察主动脉窦胶处原纤维含量变化,HE染色观察小鼠肝脏病理变化,运用酶标仪检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。结果:1.体质量:各组间治疗前小鼠体质量差异无统计学意义;12周后,与模型组相比,西药组和活血化痰方组小鼠体质量水平均下降（P＜0.05）。2.主动脉窦病理变化:⑴HE染色:与空白组比较,模型组主动脉窦处的形成的粥样斑块面积增加（P＜0.05）;与模型组相比,西药组、活血化痰方组主动脉窦处的形成的粥样斑块面积均减少（P＜0.05）。⑵油红O染色:空白组小鼠主动脉管壁未见明显的脂质沉积,与空白组相比模型组的小鼠主动脉管壁有脂质沉积增多的趋势,与模型组相比,西药组、活血化痰方组小鼠主动脉管壁处的脂质沉积情况均有减少的趋势。⑶Masson染色:与模型组比较,活血化痰方组小鼠斑块中胶原纤维含量有增加趋势。3.肝脏病理变化:模型组肝脏组织脂质沉积明显,肝脏细胞脂肪变性程度较为严重,细胞内出现许多面积不等的脂肪滴。与模型组相比,西药组、活血化痰方组小鼠肝脏组织中肝小叶和肝细胞索的结构均较为清晰,肝细胞内脂质沉积程度均有不同程度的减轻。4.血清血脂:⑴TC:与空白组相比,模型组小鼠血清TC水平显著升高（P＜0.01）。⑵LDL-C:与空白组相比,模型组小鼠血清LDL-C水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,活血化痰方组小鼠血清LDL-C水平下降（P＜0.05）。⑶HDL-C:各组之间的HDL-C均无统计学差异。⑷TG:各组之间的TG均无统计学差异。结论:Apo E-/-小鼠喂以高饲料12周可形成动脉粥样硬化斑块,结合病理实验结果表明动物模型选用合适且造模方法成功,且活血化痰方具有抗动脉粥样硬化斑块形成及稳定斑块的作用。同时活血化痰方能改善Apo E-/-小鼠肝脏中脂质沉积及肝脏细胞脂肪变性的程度。此外,活血化痰方能降低Apo E-/-小鼠外周血中LDL-C的水平,具有降低血脂的作用减少血管内脂质沉积的作用。第二部分活血化痰方对Apo E-/-小鼠胆固醇稳态的作用目的:通过研究活血化痰方对Apo E-/-小鼠肝脏中核转录因子、核受体,肠道中胆固醇吸收以及肝脏中胆固醇合成、转运、逆转运、排泄等相关m RNA和蛋白水平表达的影响,及通过检测Apo E-/-小鼠肝脏中与脂质代谢关键蛋白（HMGCR、ABCA1、LDLR、CYP7A1）相关的micro RNAs,探讨活血化痰方对胆固醇稳态的调节作用及机制。方法:1.运用real-time RT-PCR技术检测小鼠肠道中胆固醇吸收（NPC1L1L、ABCG5/8、ACAT1、ACAT2）,以及小鼠肝脏中胆固醇合成（HMGCR）、转运（PCSK9、LDLR）、逆转运（LCAT、SRBI、ABCA1）、排泄（ABCG5/8、CYP7A1）,小鼠肝脏中核转录因子及核受体（SREBP-1、SREBP-2、LXR-α）等相关m RNA水平表达的变化。2.根据RT-PCR实验结果,运用Western blotting法检测小鼠肝脏中胆固醇合成（HMGCR）、转运（LDLR）、逆转运（ABCA1）、排泄（CYP7A1）等相关的蛋白水平表达的变化。3.运用real-time RT-PCR技术检测小鼠肝脏调控胆固醇稳态相关micro RNAs（mi R-27b,mi R-33）水平表达的变化。结果:1.肠道胆固醇吸收:⑴NPC1L1:与模型组相比,西药组NPC1L1 m RNA水平显著升高（P＜0.01）;与西药组相比,活血化痰方组NPC1L1 m RNA水平降低（P＜0.05）。⑵ABCG5:各组间均无统计学意义。⑶ABCG8:各组间均无统计学意义。⑷ACAT1:与模型组相比,活血化痰方组小鼠小肠ACAT1 m RNA水平有上升趋势。⑸ACAT2:与模型组相比,活血化痰方组ACAT2 m RNA水平显著升高（P＜0.01）。2.肝脏胆固醇合成:与模型组相比,活血化痰方组HMGCR m RNA水平降低（P＜0.05）;与空白组相比,模型组小鼠肝HMGCR蛋白水平降低（P＜0.05）;与模型组相比,活血化痰方组小鼠肝脏HMGCR蛋白水平降低（P＜0.05）。3.胆固醇合转运:⑴PCSK9:与模型组相比,西药组PCSK9 m RNA水平上升（P＜0.05）;与西药组比,活血化痰方组PCSK9 m RNA水平降低（P＜0.05）。⑵LDLR:与模型组相比,活血化痰方组LDLR m RNA水平有上升趋势;与模型组相比,活血化痰方组小鼠肝脏LDLR蛋白水平上升（P＜0.05）;与西药组相比,活血化痰方组小鼠肝脏LDLR蛋白水平上升（P＜0.05）。4.肝脏胆固醇逆转运:⑴LCAT:与模型组相比,活血化痰方组LCAT m RNA水平升高（P＜0.05）。与西药组相比,活血化痰方组LCAT m RNA水平升高（P＜0.05）。⑵SRBI:各组之间的SRBI m RNA水平均无统计学差异。⑶ABCA1:与模型组相比,活血化痰方组ABCA1 m RNA水平显著升高（P＜0.01）;与西药组相比,活血化痰方组ABCA1 m RNA水平升高（P＜0.05）;与模型组相比,活血化痰方组小鼠肝脏ABCA1蛋白水平显著上升（P＜0.01）。5.肝脏胆固醇排泄:⑴ABCG5:与模型组相比,活血化痰方组ABCG5 m RNA水平升高（P＜0.05）。⑵ABCG8:与模型组相比,活血化痰方组ABCG8 m RNA水平升高（P＜0.05）。⑶CYP7A1:与模型组相比,活血化痰方组CYP7A1 m RNA水平显著升高（P＜0.01）;与空白组相比,模型组小鼠肝CYP7A1蛋白水平降低（P＜0.05）;与模型组相比,活血化痰方组小鼠肝脏CYP7A1蛋白水平显著上升（P＜0.01）。6.肝脏中核转录因子及核受体:⑴SREBP-1:各组之间的SREBP-1 m RNA水平均无统计学差异。⑵SREBP-2:与空白组相比,模型组SREBP-2 m RNA水平显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,活血化痰方组SREBP-2 m RNA水平均升高（P＜0.05）。⑶LXR-α:与模型组相比,活血化痰方组LXR-αm RNA水平升高（P＜0.05）。7.肝脏中micro RNAs:⑴与模型组相比,活血化痰方组小鼠肝脏mi R-27b水平降低（P＜0.05）;与西药组相比,活血化痰方组小鼠肝脏mi R-27b水平降低（P＜0.05）。⑵与西药组相比,活血化痰方组小鼠肝脏mi R-33水平显著降低（P＜0.01）。结论:活血化痰方通过抑制HMGCR m RNA及蛋白水平减少内源性胆固醇合成、上调LXR-α/CYP7A1/ABCG5/8信号通路促进肝脏胆固醇排泄,且能调节SREBP-2/LDLR信号通路促进肝细胞外胆固醇转运至肝脏组织进行代谢。同时活血化痰方能通过抑制Apo E-/-小鼠肝脏中mi R-27b的水平促进脂质代谢相关蛋白ABCA1及LDLR的表达,多靶点维持机体胆固醇稳态。综上,活血化痰方可降低小鼠血清中LDL-C水平,改善肝脏组织病理改变,发挥抗动脉粥样硬化的作用。