P物质预先给药对去甲肾上腺素诱导培养大鼠心肌细胞β-受体表达的调节作用

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目的:观察P物质(Substance P.SP)与去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)单独作用对心肌细胞β1-受体(β1-R)表达的影响,以及SP预先给药对NE诱导的心肌细胞β1-R表达的影响。 方法:(1)心肌细胞的培养及鉴定。实验选用1-3 d龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌细胞体外培养模型,采用免疫细胞化学(IC)染色方法对心肌细胞进行鉴定。 (2)观察不同浓度NE的作用。取15孔培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(不加药物干预)与NE组[分别给予NE(终浓度分别为10-9mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1和10-6mol·L-1)干预],n=3。细胞培养基内分别加入NE共培3h后,采用IC染色方法测定心肌细胞内β1-R表达的变化。另外再取15孔培养的心肌细胞,分组与药物干预均同上,采用流式细胞术(FCM)测定心肌细胞β1-R的表达变化。 (3)观察不同浓度SP的作用。实验选用6孔培养72h的心肌细胞随机分为2组(n=3):正常对照组(不加药物干预)与实验组(给予终浓度为10-7mol·L-1SP干预)。SP作用3h后,采用IC染色方法测定心肌细胞内β1-R表达的变化。另外再取15孔培养的心肌细胞,随机分为对照组(不加药物干预)与SP组(分别给予10-9、10-8、10-7、10-6mol·L-1SP干预),n=3。细胞培养基内分别加入SP共培3 h后,采用FCM测定心肌细胞β1-R表达的变化。 (4)观察SP预先给药对NE作用的影响。实验选用12孔培养72h的心肌细胞随机分为4组(n=3):对照组(不加药物干预)、10-7mol·L-1NE组、10-6mol·L-1SP+10-7mol·L-1NE组(给予SP 30 min后再加入NE)、NK-1受体拮抗剂(S3144)+10-6mol·L-1 SP+10-7mol·L-1NE组(给予S3144 30 min后加入SP,再培养30 min后加入NE),n=3。采用FCM测定心肌细胞β1-R的表达变化。 结果:(1)成功建立大鼠心肌细胞体外培养模型。 (2)IC与FCM结果均显示,与对照组比较,10-9、10-8、10-7、10-6mol·L-1NE组β1-R表达均上调,两种方法中,10-8mol·L-1。(IC)与10-7mol·L-1(FCM)NE组β1-R表达上调最明显。 (3)IC结果显示,SP组β1-R表达低于对照组(P<0.05)。FCM结果显示,10-9、10-8、10-7、10-6mol·L-1SP组β1-R表达均低于对照组,除10-9mol·L-1SP组外,其余各组与对照组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。 (4)与对照组比较,NE组β1-R表达上调(p<0.05),SP+NE组β1-R表达无明显变化(p>0.05),S3144+SP+NE组β1-R表达上调但差异无统计学意义(p>0.05)。 结论:(1)NE可诱导体外培养的大鼠心肌细胞β1-R表达上调。 (2)SP可诱导体外培养的大鼠心肌细胞β1-R表达下调。 (3)SP预先干预可抑制NE引起的体外培养大鼠心肌细胞β1-R表达的上调,该作用可能部分由NK-1受体所介导。
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