论文部分内容阅读
目的探讨跑台运动对大鼠高血脂脑缺血再灌注后海马区Ku蛋白和细胞周期蛋白的作用。方法本实验将SPF级雄性高血脂诱导的Wistar大鼠120只随机分为:对照组(n=40),模型组(n=40)、实验组(n=40)。高血脂模型采用高血脂饲料喂养6周形成高血脂大鼠后。实验组于建模前15天开始进行跑台运动20m/min,30min/day,应用四血管阻断法(Pulsinelli4VO法)制备全脑缺血模型,分别于缺血15min再灌注后3h、6h、24h和48h四个时间点处死大鼠,缺血再灌注后24h和48h大鼠在处死前采用水迷宫检测各组大鼠视空间记忆。各时间点的标本采用苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察各组大鼠脑组织神经元细胞形态的变化情况;采用免疫组织化学染色和免疫印迹蛋白(western-blotting)方法检测各组大鼠脑组织中Ku70、Ku80、CycinA和CyclinE蛋白的表达情况。应用SPSS17.0统计分析软件对所得实验数据进行重复设计的单因素方差分析,以P<0.05,表示差异具有统计学意义。结果1水迷宫检测结果:与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(24h、48h)的潜伏期时间显著延长,穿台次数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(24h、48h)的潜伏期时间显著缩短而穿台次数显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。2形态观察结果(HE染色)对照组大鼠海马区神经元细胞排列整齐,胞浆淡染;模型组与对照组比较3h结构形态即出现形态改变,表现为细胞失去正常结构,部分细胞形态异常,6h海马区可见较多肿胀的神经元,间质水肿,结构疏松,神经元和胶质细胞出现核固缩、深染,也有部分神经元胞核完全消失,形成空泡状结构;24h脑组织神经细胞破坏,可见较多变性坏死的神经细胞,神经细胞呈空泡状或海绵状,神经元细胞出现核固缩、碎裂和核仁消失现象,间质水肿明显;48h可见坏死神经细胞,脑组织结构破坏,结构疏松,核膜碎裂、核仁消失,各时间点中以48h损伤最严重;实验组大鼠海马区神经元损伤较模型组明显减轻,可见坏死的神经元减少,间质水肿较轻,核固缩和空泡较少。3Ku70免疫组化和Western blot分析结果:免疫组化结果:Ku70免疫组化染色呈棕黄色,定位于细胞胞浆中,主要表达在神经元细胞。与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表达增加,且24h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot分析结果:与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表达增加,且24h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。4Ku80免疫组化和Western blot分析结果:免疫组化结果:Ku80免疫组化染色呈棕黄色,定位于细胞胞核中,主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表达明显增加,且6h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot分析结果:与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表达明显增加,且6h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。5CyclinA免疫组化和Western blot分析结果:免疫组化结果:CyclinA免疫组化染色呈棕黄色,定位于细胞胞核中,主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinA蛋白的表达量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinA蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot分析结果:与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinA蛋白的表达量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinA蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。6CyclinE免疫组化和Western blot分析结果:免疫组化结果:CyclinE免疫组化染色呈棕黄色,定位于细胞胞核中,主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot分析结果:与对照组比较,模型组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠在各时间点(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1跑台运动可改善全脑缺血再灌注大鼠空间记忆功能。2跑台运动可增加Ku蛋白的表达,同时调控CyclinA和CyclinE的表达,对脑缺血有保护作用。