【摘 要】
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转基因抗虫作物的商业化种植,有效控制了靶标害虫的为害,为农业经济增长、粮食安全和生态环境安全做出了重要贡献。我国在转Bt基因抗虫水稻的研发和应用方面一直处在世界前列并
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转基因抗虫作物的商业化种植,有效控制了靶标害虫的为害,为农业经济增长、粮食安全和生态环境安全做出了重要贡献。我国在转Bt基因抗虫水稻的研发和应用方面一直处在世界前列并取得突破性进展,为靶标害虫二化螟等重要害虫的防治提供了有效途径。但Bt水稻大面积种植后,可能引起二化螟等主要靶标害虫的抗性演化。因此,延缓害虫抗性发展,制定适宜的抗性治理策略已成为抗虫水稻生产应用的当务之急,而明确害虫抗性产生的分子机制是实施害虫抗性治理策略的前提和基础。ABCC2是昆虫中的一种跨膜转运蛋白,很多研究已报道:昆虫中肠ABCC2蛋白是Bt杀虫毒素的功能性受体,并在烟芽夜蛾、粉纹夜蛾等多种鳞翅目中证实ABCC2的变异与昆虫Bt抗性密切相关,但ABCC2在Bt毒素对二化螟杀虫机制中的作用还未有报道。因此,本研究以室内饲养的二化螟Bt敏感品系、Cry1C和Cry1Ab抗性品系为研究对象,通过实时荧光定量PCR分析了二化螟Bt敏感、Cry1C和Cry1Ab抗性品系中CsABCC2基因的表达水平;采用RNA干扰技术沉默了二化螟CsABCC2基因并明确了其在Bt毒素杀虫机制中的作用,为进一步阐明ABCC2介导的二化螟Bt抗性机制奠定基础。主要研究结果如下: 1、以二化螟Bt敏感、Cry1Ab和Cry1C抗性品系为研究对象,利用qRT-PCR定量分析了3个品系中CsABCC2基因的表达水平。结果表明,在二化螟Bt敏感品系(FZS)不同发育时期中,CsABCC2基因在3龄和4龄幼虫中的表达水平最高,在二化螟(FZS)3龄幼虫的不同组织器官中,前肠和中肠中CsABCC2基因的表达丰度最高。 通过对二化螟Bt抗、感品系中CsABCC2的表达水平进行比较,发现二化螟Cry1C抗性品(FZ-Cry1C-R)1龄至5龄幼虫CsABCC2基因的表达水平均显著低于敏感品系(FZS)一龄至五龄幼虫CsABCC2基因的表达水平;二化螟Cry1Ab抗性品系(FZ-Cry1Ab-R)3龄和4龄幼虫CsABCC2基因的表达水平显著低于敏感品系(FZS)3龄和4龄CsABCC2基因的表达水平。 2、为了进一步探索二化螟ABCC2在Bt毒素杀虫过程中的作用,我们利用RNA干扰的方法降低二化螟初孵幼虫CsABCC2基因的表达水平。二化螟初孵幼虫取食混有dsRNA的饲料48小时后,幼虫CsABCC2基因的表达水平与对照组相比显著降低了70%。 Bt毒素生物测定结果显示,RNAi沉默CsABCC2基因的表达显著降低了二化螟幼虫对Cry1C、Cry1Ab的敏感性。通过比较二化螟幼虫在Cry1C、Cry1Ab毒饲料上的死亡率发现,ABCC2在Cry1C、Cry1Ab毒素对二化螟的毒杀机制中起到重要作用。 本研究明确了二化螟ABCC2蛋白在Cry1C、Cry1Ab毒素杀虫机制中的作用,研究结果为ABCC2引导的二化螟Bt抗性治理提供了理论依据。
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