变绿红菇多糖的分离纯化与结构分析

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变绿红菇(Russula virescens)又名青头菌,青冈菌,绿豆菌。隶属于担子菌门,伞菌亚门,层菌纲,伞菌目,红菇科,红菇属。它是一种大型食用真菌,味美可口,营养丰富。多糖作为变绿红菇中重要的活性物质之一,具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化及降血糖等多种生物活性。目前对变绿红菇多糖的研究多集中于多糖的提取和生物活性方面,在结构分析方面研究较少。为了深入的了解变绿红菇中多糖的类型及其组成和结构,我们设计了本论文的研究内容,具体研究结果如下:以干燥的变绿红菇子实体为实验原料,采用热水煮提、乙醇沉淀的方法得到水提变绿红菇总多糖WRVP,得率为5.62%(相对于干重得率)。经测定,WRVP的总糖含量为66%,蛋白质含量为3.4%,盐分含量为8.8%,几乎不含糖醛酸和淀粉。单糖组成分析结果表明,WRVP主要由Glc(85.5%)和Gal(7.4%)组成,此外还含有Man(3.6%)和Fuc(0.9%),以及少量Ara(0.8%)和GlcA(0.6%)。采用DEAE-Cellulose离子交换层析对WRVP进行分级,得到蒸馏水洗脱的中性糖级分WRVP-N和0.25 M NaCl洗脱的酸性糖级分WRVP-A。进一步使用凝胶柱层析Sepharose CL-6B对它们进行纯化,得到3个均一级分:WRVP-N-b、WRVP-N-c和WRVP-A-a。分子量测定、单糖组成分析、甲基化以及核磁共振分析结果表明WRVP-N-b主要由Gal(66.6%)、Man(15.1%)、Fuc(12.9%)以及少量Glc构成,分子量约为11 kDa,结构是以α-1,6-Galp和α-1,6-D-Me-Galp构成主链,在部分Gal的O-2位连有侧链,侧链结构为部分α-1,2-L-Fucp、t-α-D-Manp、t-α-D-Galp和少量t-α-L-Fucp构成的岩藻甘露半乳聚糖。WRVP-N-c结构与WRVP-N-b类似,分子量约为4.4 kDa。WRVP-A-a主要由Glc(89.7%)构成,分子量为430 kDa,结构是以β-1,6-D-Glcp为主链,在部分Glc的O-3位连有侧链为β-1,3-D-Glcp和t-β-D-Glcp的葡聚糖。上述研究结果完善了变绿红菇多糖的结构信息,为深入研究真菌多糖结构规律及生物活性和探讨其构效关系提供了理论依据。
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