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目的:固有免疫紊乱在自身免疫性疾病的发生发展中起重要作用,其中TLR9介导的固有免疫信号通路异常在自身免疫性疾病发病机制中可能起重要作用。本课题拟在前期研究基础上通过进一步实验探究TLR9介导的固有免疫信号通路功能异常在SS发生发展中作用的分子机制。以期为SS的发病机制研究及药物治疗靶点的开发提供理论基础。方法:应用流式细胞学技术及免疫组织化学技术检测处于不同发病阶段的SS模型小鼠NOD/Ltj鼠PBMCs及下颌下腺组织中TLR9介导的p38MAPK信号通路的活化情况,进一步应用相关信号通路抑制剂TLR9抑制剂ODN2088、p38MAPK抑制剂VX-702,观察小鼠临床表现、组织病理学及实验室指标改变。应用lncRNA芯片技术在4例SS患者及4例正常对照中筛选SS靶器官唇腺组织中差异表达的lncRNA,应用Realtime PCR技术在30例SS患者及16例正常对照中验证芯片结果,并与临床指标进行相关性分析。利用生物信息学技术进行相关数据分析预测可能调控TLR9的lncRNA。应用Realtime PCR技术检测SS患者PBMCs中TLR9信号通路负反馈调节因子miR-146a及靶基因FADD、IRAK-1、TRAF-6的表达水平,并进行表达水平相关性分析。结果:TLR9和p-p38 MAPK双阳性细胞比率在NOD/Ltj鼠PBMCs中在发病早期呈显著增高,早期应用TLR9抑制剂ODN2088能够较大程度地改善NOD/Ltj小鼠的临床症状、组织病理学表现及实验室指标;LncRNA芯片结果显示相较于正常对照组,在SS患者唇腺组织中表达上调和下调超过2倍的lncRNA分别有890种和353种,mRNA分别有1141种和316种;Realtime PCR验证结果显示其中8种lncRNA在SS患者唇腺组织中存在不同程度升高并与临床指标呈显著相关性,进一步生物信息学分析结果显示,其中lncRNA n340599的表达水平与TLR9的表达水平显著正相关;负反馈调节因子miR-146a在SS患者PBMCs中的表达量显著升高,并与腮腺区肿胀VAS、眼干VAS呈正相关性,其靶基因中调控免疫细胞凋亡过程的FADD在SS中的表达水平显著降低,并与miR-146a的表达水平呈显著负相关,而参与TLR9信号通路激活的靶基因IRAK-1与TRAF-6在SS中的表达水平不明显,并与miR-146a表达水平无显著相关性。结论:以上实验结果证实TLR9信号通路在SS发病早期起重要的促进作用;在SS靶器官唾液腺组织中的TLR9,可能受到lncRNA n340599的调控而出现高表达,从而成为SS发生的始动因素;而TLR9信号通路的负反馈调节因子miR-146a在SS中可能未起到免疫负调控作用,反而抑制了自身反应性淋巴细胞凋亡,对疾病的发展起到一定的促进作用。