西乡浆水产细菌素乳酸菌的分离及细菌素的纯化

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuehan3269
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细菌素是天然抗菌蛋白质或者多肽,可以作为防腐剂用于食品工业,作为抗生素替代物也具有潜在的医疗应用价值。本研究从西乡浆水中分离出31株乳酸菌,以大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923为指示菌,通过双层平板法从中筛选出了20株具有不同抑菌能力的乳酸菌。根据抑菌活性大小选择抑菌效果最强的4株菌,通过牛津杯法选择出所产细菌素抑菌效果最显著的菌株MXJ32用于后续研究。通过PCR扩增MXJ32菌株16S rDNA并测定其序列,经NCBI序列比对分析鉴定为棒状乳杆菌(Lactobacilluscoryniformis)。MXJ32菌株采用硫酸铵沉淀获得的粗细菌素,经透析、离子交换色谱、阳离子交换色谱和阴离子交换色谱纯化,获得纯细菌素,并命名为lactocin MXJ32A。LC-ESI/MS测得该细菌素分子量为3520Da。N端12个氨基酸的序列如下:N-GEPGPMGPAGAD,在NCBI数据库中搜索,未发现相似细菌素。其氨基酸组成中疏水性氨基酸含量约为52%。细菌素lactocin MXJ32A对热稳定,在60℃、80℃、100℃和120℃下分别加热5、10和20min后,细菌素抑菌活性基本不变。MXJ32A在较宽的pH范围内(pH2-11)显示良好的稳定性,且pH越低,抑菌活性越强。细菌素lactocin MXJ32A为蛋白质性质,不含有糖链或者脂链。该细菌素的溶血能力同氨苄青霉素相近,在使用浓度范围内不会发生溶血现象。细菌素lactocin MXJ32A是一种广谱抑菌物质,对G+和G-菌都有不同程度的抑制作用,包括食源性耐药菌和致病菌。该细菌素对标准金黄色葡萄球菌ATCC29213和大肠杆菌ATCC25922的最小抑菌浓度均为10mg/mL。扫描电镜和透射电镜观察细菌素处理后的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,与未处理的相比,处理后的指示菌出现凹陷、破裂、渗漏、空洞等现象,导致目标菌死亡。
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