茄子花青素合成相关基因SmMYB的克隆与功能研究

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茄子(Solanum melongena L.)是为数不多富含花青素的蔬菜作物之一。花青素是一种广泛存在于植物中的天然色素,具有很好的抗氧化性,在药品、保健品等方面得到了广泛应用,具有很好的市场前景。然而对茄子花青素合成研究还集中于抗氧化性评价及关键酶基因筛选,对转录因子的基因克隆及调控机制研究尚未见报道。本研究内容及结果如下:1.选用表型有明显差异的茄子种质资源作材料。YZ14表型为无刺、紫茎、紫花、紫果; YZ3表型为有刺、绿茎、白花、白果。采用同源克隆与RACE(rapid amplification of cDNA ends)相结合的方法克隆了茄子MYB基因cDNA及gDNA全长序列,命名为SmMYB。2. SmMYB基因cDNA全长1035bp,开放阅读框从第69bp-905bp处共837个核苷酸,编码278个氨基酸。氨基酸序列比对结果表明,SmMYB与辣椒(Capsicum annuum L.)MYB转录因子氨基酸序列相似性达71%。预测成熟蛋白的等电点为8.47,具有2个典型的DNA-binding结构域且亚细胞定位于细胞核,为典型的R2R3MYB转录因子。gDNA全长3834bp,包含3个外显子及2个内含子。3.用打孔法及削皮法采集茄子果皮,进行花青素含量测定,对重复实验结果进行分析,发现削皮法采集的果皮花青素含量测定值更高,且数据方差相对较小,认为削皮法更适合茄子果皮取样。4.对茄子根、茎表皮、嫩叶、花瓣、果皮组织进行花青素含量测定,检测结果显示,紫茄果皮花青素合成量显著高于紫茄其他组织及白茄各组织。荧光半定量PCR检测结果表明,SmMYB基因表达水平具有组织特异性,在紫茄果皮中表达水平显著高于紫茄其他组织及白茄各组织,认为SmMYB与茄子花青素合成相关。此外,该基因在白茄各组织中亦有低量表达,推测与SmMYB的表达模式有关。5.对紫茄进行不同程度的遮光处理后,分别检测果皮中花青素含量及SmMYB、SmDFR基因表达水平。结果表明,遮光处理显著抑制紫茄果皮花青素合成及基因表达,且三者变化趋势相似。进一步验证了SmMYB、SmDFR参与茄子花青素合成,且表达水平与花青素合成量呈正相关。综上所述,SmMYB为一个R2R3MYB转录因子,正向调控茄子花青素合成。
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