重组鸭α、γ干扰素的研制及其抗病毒作用研究

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近几年随着养殖规模的扩大和集约化程度的不断提高,鸭病的种类也越来越多,其危害也越来越严重,目前流行严重的鸭病毒性疾病主要有鸭病毒性肝炎、鸭瘟、鸭流感等。干扰素系统是机体对抗病毒感染的重要防御系统。由于抗体、补体仅存在于血清和细胞外液中,故它们对在细胞内繁殖的病毒无作用。而当干扰素系统被激活后,血清干扰素可以在几分钟之内散布到身体的各种器官中,而细胞接触干扰素只需几分钟,就产生抗病毒状态。并且,动物可以在1~3周时间内对其它病毒的重复感染也有抵抗作用。根据干扰素的氨基酸序列、抗原性和细胞来源的不同可将其分为2个型:Ⅰ型干扰素的主要成员为α-干扰素和β-干扰素,Ⅱ型干扰素为γ干扰素。Ⅰ型干扰素具有较强的抗病毒功能,Ⅱ型干扰素抗病毒功能稍弱,但免疫调节功能较强。自1986年以来,各型重组干扰素相继投放市场,在医学临床治疗过程中发挥了巨大的作用,特别是对病毒性肝炎等的治疗效果明显,而且副作用较轻。相对而言,动物干扰素的研究滞后许多,目前仍主要停留在基础研究和临床试验阶段,且大多数集中在猪、鸡、鱼等少数动物,但近年来也取得了不小的进步,目前已有商品化的猪、犬、鸡等重组干扰素产品面市。近年来,鸭干扰素(Duck interferon,DuIFN)的抗病毒和疫苗佐剂功能也在更多的试验中被发现和证实。本研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组鸭α和γ干扰素并研究其抗病毒功能,为我国重组鸭干扰素的工程化生产及其在养鸭业中的应用奠定基础。研究主要从以下几个方面展开: 1.经Con A刺激诱导鸭外周血单核细胞(PBMC),应用RT-PCR法扩增出鸭α干扰素(DuIFN α)基因并克隆到pMD 18-T载体,测序结果表明:扩增片段是含有信号肽的鸭α干扰素完整基因,与NCBI上登录的DuIFN-α基因序列(accession number X84764)同源性为100%。亚克隆鸭α干扰素成熟蛋白编码基因,将特异性片段连接至原核表达载体pET28a(+),构建原核表达载体pET28a-DuA,并进行表达,经SDS-PAGE分析,原核表达产物为约28kD的融合蛋白,表达产物约占菌体总蛋白的22.8%。表达产物以包涵体形式存在。
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