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色谱分离材料是色谱技术的核心,是各种分离模式赖以建立和发展的基础。开发和制备结构新颖、分离性能优异的分离材料一直是色谱研究领域的热点之一。本论文成功制备了多种新型色谱分离材料,这些材料在手性化合物拆分、碱性化合物分离以及生物样品中糖蛋白的分离鉴定方面均取得优异效果。针对目前β-环糊精手性固定相存在合成路线繁琐、稳定性差、功能基团密度低等问题,我们采用巯基-烯点击化学方法快速、高效地将苯基异氰酸酯功能化的p-环糊精接枝到3-巯丙基功能化二氧化硅微球上,成功制备了β-环糊精手性固定相。该方法具有反应步骤少、操作简单、反应条件温和、反应效率高等特点。该固定相在HPLC中成功地拆分了15种对映体,而且分离的重现性良好。针对碱性化合物在反相液相色谱分离中容易出现色谱峰拖尾的问题,我们在3-氨丙基功能化二氧化硅微球表面依次采用Michael加成反应和巯基-炔点击化学反应,制备了分支状十八烷基修饰的二氧化硅微球固定相。该固定相对三种碱性药物组成的混合物和延胡索水提物的分离效果明显优于适合极性化合物分离的Atlantis dC 18柱。针对目前常用的亲水作用色谱材料在糖肽富集时出现特异性差、灵敏度低的问题,我们采用可逆加成-断裂链转移(RAFT)聚合方式制备了聚2-(甲基丙烯酰基氧基)二甲基-(3-磺酸丙基)氢氧化铵(PMSA)功能化的二氧化硅纳米微球(SiO2-RAFT@ PMSA)。该亲水性纳米微球对人IgG胰蛋白酶解液中糖肽检测限为10 fmol,回收率为88.7%-97.1%。进一步将SiO2-RAFT@PMSA应用于鼠肝样品中糖肽的富集,在3次质谱重复中共鉴定到303个非冗余糖基化位点和185个糖蛋白,这一结果明显优于其它方式制备的二氧化硅微球,包括单层功能分子修饰的SiO2@single-MSA、多层不均匀PMSA刷修饰的SiO2@PMSA、商品化ZIC@HILIC材料以及Click Maltose材料。针对目前常用的肼化学功能化材料在糖肽富集时存在分离过程耗时、表面肼基团含量低的问题,我们采用RAFT聚合方式制备了肼聚合物刷功能化磁性纳米颗粒(Fe3O4@SiO2@GMA-NHNH2)。该材料对糖蛋白酶解液中糖肽的富集效果要明显优于单层肼基团修饰磁核(Fe3O4@SiO2-single-NHNH2),并且与商品化的Affi-Gel Hz酰肼微球的性能相当。进一步将其应用于肝癌组织样品中糖肽的富集,结果发现这种新型肼聚合物刷功能化磁性纳米颗粒鉴定到的糖基化位点数为189,而采用单层肼基团修饰磁性纳米颗粒只能鉴定到68个糖基化位点。