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急性肺损伤(acute lung injury,ALI)及其进一步发展引起的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是许多呼吸系统疾病的重要病理过程,其中肺内炎症爆发是导致ALI/ARDS发生发展的重要因素之一。因此,抑制ALI/ARDS早期的过度炎症反应可减轻肺组织损伤,改善ALI/ARDS预后。髓样细胞表达触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)是广泛表达于中性粒细胞和单核/巨噬细胞膜上的受体,研究表明TREM-1激活后能够直接放大炎症反应,阻断TREM-1激活可减轻ALI。白藜芦醇(resveratrol)是一种天然植物提取物,其广泛存在。研究表明白藜芦醇具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤的作用。白藜芦醇是否可以通过调控TREM-1的表达与活化,抑制炎症放大效应,从而减轻ALI尚未明确。目的:观察白藜芦醇对脂多糖诱导的ALI的影响,并探讨白藜芦醇对ALI时炎症放大受体TREM-1表达的影响及机制。方法:1.以昆明小鼠为研究对象,随机分为正常组、ALI组及白藜芦醇+ALI组。采用小动物呼吸功能检测仪检测观察各组小鼠的呼吸频率、肺顺应性、潮气量及气道阻力。采用HE染色及病理损伤评分系统评估肺组织病理改变,测定肺组织湿/干重比。测定小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及支气管肺泡灌洗液(BALF)中乳酸脱氢酶(LDH)活性。BALF中细胞用于分类计数、采用ELISA法检测BALF炎性因子的蛋白含量。Real-time PCR检测肺组织IL-1β、IL-18及TREM-1 mRNA表达。采用免疫组化检测肺组织中TREM-1蛋白的表达。2.以对数生长期的巨噬细胞(RAW264.7细胞株)为研究对象。依据实验分为对照组、LPS组、白藜芦醇+LPS组、白藜芦醇+LPS+BAY11-7082(NF-κB抑制剂)组和白藜芦醇+LPS+PD98059(ERK抑制剂)组。Real-time PCR法测定各组巨噬细胞中TREM-1 mRNA表达。结果:1白藜芦醇减轻LPS诱导的ALIALI小鼠动物模型建立后,运用小动物呼吸功能检测仪检测小鼠呼吸功能。腹腔注射LPS 6 h后观察到小鼠呼吸频率、肺顺应性、潮气量均降低,气道阻力增加,在LPS刺激前2 h给予白藜芦醇干预能够显著改善LPS诱导的ALI小鼠的呼吸功能。HE染色及肺组织病理损伤评分结果显示:ALI组小鼠肺泡充血、出血,中性粒细胞浸润及白细胞聚集,肺泡壁增厚,而白藜芦醇能减轻肺病理损伤。ALI组肺湿/干重比值和MPO活性较正常组增大,白藜芦醇+ALI组湿/干重比值和MPO活性较ALI组减小。ALI组总蛋白含量及LDH活性较正常组均增加,而白藜芦醇+ALI组相较ALI组有不同程度减轻。ALI组总细胞数及中性粒细胞数显著增加,而在白藜芦醇+ALI组则明显减少。与正常组比较,ALI组IL-1β及IL-18蛋白表达增加,在白藜芦醇+ALI组,IL-1β及IL-18蛋白表达要低于ALI组。2白藜芦醇通过调控TREM-1的表达减轻ALI时肺内的炎症反应2.1白藜芦醇降低ALI时小鼠肺内TREM-1 mRNA及蛋白的表达LPS腹腔注射6 h后,Real-time PCR法检测小鼠肺内TREM-1 mRNA的表达,发现ALI组较正常组显著增加,而白藜芦醇+ALI组小鼠肺内TREM-1mRNA的表达较ALI组显著降低;免疫组化检测小鼠肺内TREM-1蛋白表达,发现ALI组较正常组上调,白藜芦醇+ALI组小鼠肺内TREM-1蛋白表达较ALI组下调。2.2白藜芦醇降低LPS应激小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达通过Real-time PCR法检测LPS应激小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA表达,结果显示:LPS组TREM-1 mRNA表达较对照组增加,白藜芦醇+LPS组TREM-1 mRNA表达较LPS组降低;采用不同浓度白藜芦醇(0.001、0.01、0.1、1μM/L)预处理后可见随着白藜芦醇浓度的增加,小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达逐渐降低;当白藜芦醇浓度为1μM/L时,小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达最低;白藜芦醇预处理2 h,LPS刺激后于不同时间点(0、3、6、12、24h)检测小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达,结果显示6 h时明显减少,24h表达最少。3白藜芦醇通过ERK及NF-κB路径抑制TREM-1的表达与活化采用Real-time PCR法检测白藜芦醇调控TREM-1的机制通路。结果显示:白藜芦醇+LPS+PD98059组及白藜芦醇+LPS+BAY11-7082组小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达高于白藜芦醇+LPS组。结论:1.白藜芦醇可减轻LPS诱导的ALI;2.ALI时小鼠肺内TREM-1表达上调,而白藜芦醇能够降低TREM-1的表达;3.LPS上调小鼠巨噬细胞TREM-1的表达,而白藜芦醇能够通过抑制ERK及NF-κB的活化,从而下调TREM-1的表达。